李 倩 饶力群 王辅恒 杨 华 邝玮琦

（湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128）

罗汉果苷V提取条件优化研究

李 倩 饶力群 王辅恒 杨 华 邝玮琦

（湖南农业大学生物科学技术学院，湖南 长沙 410128）

建立罗汉果苷V的最佳提取工艺。采用单因素试验和正交试验考察提取溶剂浓度、提取时间、提取温度、料液比对罗汉苷V的影响。结果表明，罗汉果苷V的最佳提取工艺条件：以浓度为50%的乙醇溶液作为提取剂，回流时间为120min，物料比为1∶15（m∶V），回流温度为60℃。该条件下罗汉果苷V的提取率可达到72%。

罗汉果；罗汉果苷V；最佳提取工艺；高效液相色谱

罗汉果（corsvenor momordica fruit）为葫芦科多年生草质藤本植物罗汉果的果实，其干燥果实为圆形或长圆形。罗汉果皂甙是其强甜味的非糖物质三萜类成分之一，具有3个比较突出的特点：① 甜度高，热量低，是糖尿病患者和肥胖者的理想的食品；② 具有较强的保健功能，如：提高免疫功能、保护肝脏、降血糖血脂、抗氧化等作用；③ 无毒性，安全系数高。迄今为止，研究者已从罗汉果果实中分离并鉴定出了几种罗汉果单体皂苷，分别是：罗汉果苷Ⅳ（mogrosideⅣ）、罗汉果苷 V （mogroside V）、罗汉果苷Ⅲ （mogrosideⅢ）、罗汉果苷ⅡE（mogrosidⅡE）、罗汉果苷ⅢE（mogrosideⅢE）、罗汉果苷Ⅵ（mogrosideⅥ）、罗汉果苷 A （mogroside A）、罗汉果新苷（neomogroside）、赛门苷Ⅰ（siamensideⅠ）、11－氧化罗汉果甙（11－oxomogroside）、罗汉果二醇苯甲酸脂（mogroester）等葫芦烷三萜苷类化合物［1］。其中罗汉果苷V是一种葫芦烷四环三萜化合物，分子式为C60H102O29·2H2O，24位连接了5个糖基［2］，含量为1%，具有甜度高、热量低、热稳定性好等特点，可作为天然甜味剂开发的物质之一［3－5］。

前人［6－8］曾采用水煮法、浸渍法和超声波辅助提取法提取罗汉果总皂苷，但未见对罗汉果苷V进行提取的相关报道。本试验对罗汉果苷V的热回流提取工艺进行研究，以确定其最佳提取工艺。

1 材料与方法

1.1 试验材料与试剂

罗汉果干果：产于广西桂林；

罗汉果苷V对照品：纯度98%，西格玛奥德里奇公司；

乙醇、正丁醇：分析级，天津市大茂化学试剂厂；

甲醇：色谱级，湖南化工研究院精细化工研究所；

乙腈：分析级，上海德正化工有限公司。

1.2 试验仪器与设备

电热水浴锅：WB－2000，上海浦东物理光学仪器厂；

旋转蒸发仪：RE－52AA，上海亚荣生化仪器厂；

高效液相色谱仪：Agilent 1100，安捷伦科技有限公司；

1.3 试验方法

1.3.1 提取方法 称取罗汉果干果粉末5.00g，放入圆底烧瓶中，用乙醇回流提取，提取液过滤除渣后浓缩至干，用少量水溶解后正丁醇萃取，减压浓缩至浸膏状，甲醇溶解并定容至50mL。

1.3.2 罗汉果苷V提取条件的单因素试验

（1）乙醇浓度对提取效果的影响：根据1.3.1方法，料液比为1∶20（m∶V），提取时间120min，提取温度80℃，提取次数为2次，乙醇浓度分别设为50%，60%，70%，80%，90%。通过比较提取率，考察不同提取溶剂浓度对罗汉果苷V提取效果的影响。

（2）料液比对提取效果的影响：根据1.3.1方法，提取时间120min，提取温度为80℃，乙醇浓度为70%，提取次数为2次，料液比设为1∶10，1∶15，1∶20，1∶25，1∶30（m∶V）。通过比较提取率，考察不同料液比对罗汉果苷V提取效果的影响。

（3）提取温度对提取效果的影响：根据1.3.1方法，料液比为1∶20（m∶V），乙醇浓度为70%，提取时间120min，提取次数为2次，提取温度分别设为50，60，70，80，90℃。通过比较提取率，考察不同提取温度对罗汉果苷V提取效果的影响。

（4）提取时间对提取效果的影响：根据1.3.1方法，料液比为1∶20（m∶V），乙醇浓度为70%，提取温度为80℃，提取次数为2次，提取时间分别为60，90，120，150，180min。通过比较提取率，考察不同提取时间对罗汉果苷V提取效果的影响。

1.3.3 罗汉果苷V提取条件的正交试验 在单因素试验的基础上，以提取时间、乙醇浓度、料液比、提取温度为试验因子，以罗汉果苷V提取率为考察指标，优化罗汉果苷V的提取工艺条件。

1.3.4 分析方法

（1）HPLC检测条件：色谱柱为 Hypersil ODS柱（250mm ×416mm，5μm）；流动相为乙腈∶水 （23∶77，V∶V）；检测波长为203nm；流速为0.8mL／min，柱温35℃。

（2）标准曲线的制作：精密称取罗汉果苷V对照品0.001g，置5mL容量瓶中用流动相定容，配成浓度为0.2mg／mL的储备液。分别稀释成200，160，120，80，40，16，8mg／L，分别进样20μL，记录相应的峰面积。以峰面积（mAU）为纵坐标，罗汉果苷V进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线。

（3）供试品中罗汉果苷V含量的测定：精密称取5.000g罗汉果干燥粉末，置于圆底烧瓶中，100mL 50%乙醇回流提取1h，过滤，合并滤液，减压浓缩，流动相定容至50mL。采用上述HPLC检测条件，进样20μL，记录峰面积，罗汉果苷V的提取率按式（1）计算

式中：

y—— 提取率，%；

m样品——粗提物中罗汉果苷V的含量，g；

m总——原材料中罗汉果V的含量，g。

2 结果与讨论

2.1 罗汉果苷V的HPLC法测定结果

2.1.1 罗汉果苷V对照品含量测定 罗汉果苷V的标准曲线如图1所示，其标准曲线方程为y＝191.24x（R2＝0.993 6）。线性考察结果表明，罗汉果苷V进样量在1.600～40.000μg范围内峰面积和进样量线性关系良好。如图2所示，罗汉果苷V的出峰时间为10.039min。

图1 标准曲线图Figure 1 The standard graph

图2 罗汉果苷V对照品HPLC图谱Figure 2 HPLC chromatogram of mogroside V standard simple

2.1.2 供试品中的罗汉果苷V的含量 由图3可知，在10.097min处有一罗汉果苷V吸收峰，与图2罗汉果苷V对照品出峰时间几乎一致，峰型完整。利用面积外标法得到罗汉果苷V的含量为0.096%。

图3 罗汉果供试品溶液HPLC图谱Figure 3 HPLC chromatogram of corsvenor momordica fruit extraction

2.2 提取条件对罗汉果苷V的影响

2.2.1 乙醇浓度 由表1可知，随着乙醇浓度的增大，对罗汉果苷V的提取率也随之升高，但浓度达到70%时，提取率开始下降，这说明皂苷虽然易溶于乙醇，但并不是乙醇浓度越高越好。所以选择50%，60%，70%的乙醇浓度为3个水平，进行正交试验。

表1 乙醇浓度对罗汉果苷V提取率的影响Table 1 Effort of different concentration of alcohol on mogroside V extraction

2.2.2 料液比 由表2可知，随着料液比的增加罗汉果苷V的提取率升高，当大于1∶25（m∶V）时提取率开始下降。所以选择1∶15，1∶20，1∶25（m∶V）为3个水平，进行正交试验。

表2 料液比对罗汉果苷V提取率的影响Table 2 Effort of different material fluid ratio on mogroside V extraction

2.2.3 提取温度 由表3可知，随着提取温度的升高，罗汉果苷V的提取率增加，这是由于温度的增加加快了皂苷的溶解扩散速度，增大了在溶剂中的溶解度。当温度达到80℃，提取率趋于平缓。继续加温，罗汉果苷V提取率略有下降。由于60℃ 和90℃ 提取效率相差不大，基于提取成本考虑，选择60，70，80℃ 为3个水平，进行正交试验。

2.2.4 提取时间 由表4可知，随着提取时间的延长，罗汉果苷V的提取率增加。当时间增加到120min后，提取率逐渐平稳，这是由于随着时间的增加，罗汉果苷V逐渐被提取出来，2h可将罗汉果苷V基本提取完全。因此选择90，120，150min为3个水平，进行正交试验。

2.3 罗汉果苷V提取条件的正交试验结果

为了优化罗汉果苷V的提取条件，本试验在上述单因素试验的基础上进行四因素三水平的正交试验，因素和水平见表5，试验结果见表6。

表3 提取温度对罗汉果苷V提取率的影响Table 3 Effort of different temperature on mogroside V extraction

表4 提取时间对罗汉果苷V提取率的影响Table 4 Effort of different time on mogroside V extraction

表5 正交试验因素与水平表Table 5 Foctors and levels of orthodoxy

表6 罗汉果苷V提取的正交试验设计Table 6 Orthogonal design and result of the extraction of mogroside V

由表6可知，采用回流提取法提取罗汉果苷V，影响提取率的因素主次为A＞C＞B＞D，最优组合为A2B1C1D1，即乙醇的浓度为50%，料液比为1∶15（m∶V），提取温度为60℃，提取时间为120min。

3 结论

本试验采用HPLC法测定罗汉果干果中罗汉果苷V的含量，方法简便，结果可靠。采用有机溶剂乙醇回流提取的方法，通过对罗汉果干果的回流提取过程中影响有效成分的因素进行考察，分别对乙醇浓度，料液比、提取温度以及提取时间做单因素的水平试验，然后采用正交试验对提取工艺条件进行最优化。试验结果表明，最佳提取参数：采用回流提取，乙醇浓度50%，料液比1∶15（m∶V），提取温度60℃，提取时间120min，在该条件下进行验证实验，结果表明罗汉果苷V的提取率达到72%，说明该提取条件有效可行。

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Studies on the optimum extraction technology of mogroside V in corsvenor momordica fruit

LI Qian RAO Li－qun WANG Fu－heng YANG Hua KUANG Wei－qi

（College of Bioscience and Biotechnology，Hunan Agriculture University，Changsha，Hunan410128，China）

Established the optimum extraction technology of mogrosideⅤ that was extracted from corsvenor momordica fruit.The effects of the alcohol concentration，extraction times，temperature，material－liquid ratio were investigated by oneway and orthogonal experiment.The optimum parameter of extraction had been determined that the concentration of ethanol is 50%，the multiple of ethanol to material is 1∶15（m∶V），extraction time is 120min and extraction temperature is 60℃.By this way，the rate of extraction was 72%.

corsvenor momordica fruit；mogroside V；optimum extraction technology；HPLC

10.3969／j.issn.1003－5788.2011.04.012

湖南省教育厅重点科技项目（编号：09A039）

李倩（1985－），女，湖南农业大学硕士研究生。E－mail：liqian1985116＠sina.com

饶力群

2011－04－16