胡健饶，章丽梅，史雨红，陈 炯

（1.杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州 310036；2.宁波大学生命科学与生物工程学院，浙江宁波 315211）

胡健饶1，章丽梅1，史雨红2，陈 炯2

（1.杭州师范大学生命与环境科学学院，浙江杭州 310036；2.宁波大学生命科学与生物工程学院，浙江宁波 315211）

该研究从宁波市象山港鱼养殖区患病鱼肾脏中分离到1株优势菌Mm041，人工回感试验确定该菌株为致病菌株，测定其对鱼的半致死量为3.0×106CFU.通过形态学观察、生理生化特征鉴定，并结合细菌16SrRNA基因序列同源性和系统发育分析，确定Mm041为美人鱼发光杆菌.药敏试验结果表明，该菌株对氯霉素、羧苄青霉素、头孢哌酮（先锋必）高度敏感.

鱼；美人鱼发光杆菌；鉴定

1 材料和方法

1.1 材料

大肠杆菌EscherichiacoliTG1由该试验保存，T4DNA连接酶、pMD19－T Simple Vector和Ex Taq DNA聚合酶均购自Takara公司，Gel Extraction Kit购自北京百泰克生物技术有限公司，Plasmid MiniKit购自Omega公司.细菌鉴定管和药敏纸片购自杭州天河微生物试剂有限公司.引物合成及测序由上海英骏生物技术有限公司完成.

1.2 病原菌的分离

1.3 病原菌的人工回感试验和半致死量测定

将菌株Mm041接种于普通营养肉汤培养基中，于28℃过夜培养，用0.9%的灭菌生理盐水洗涤菌体，经平板菌落计数法确定菌悬液浓度为3.0×109CFU/mL，10倍梯度稀释后备用.试验共分6个组（5个试验组和1个对照组），每组12尾鱼，试验水温为（20±1）℃.驯养7d后，试验组每尾鱼分别腹腔注射0.1mL10倍梯度稀释的菌悬液，对照组每尾腹腔注射等剂量的灭菌生理盐水.注射后每日观察试验鱼的发病症状和死亡情况，并……