陈富超，曹明燕，罗军敏，封建凯，孙万邦

（遵义医学院免疫学教研室暨贵州省免疫学研究生教育创新基地，贵州 遵义563000）

人IL-10（Human interleukin-10，hIL-10）是由多种细胞产生的细胞因子,活性形式通常是由非共价键连接两个单体而形成的同源寡二聚体，分子量为39kD，酸性条件下不稳定。不同宿主表达的重组hIL-10（rhIL-10）由于糖基化程度不同，分子量在35~40kD之间，说明不同宿主表达的IL-10在结构和功能上会有差异。毕赤酵母为真核生物，用于表达外源蛋白有诸多优点[1]，但不同酵母的微生物学特性各异，也决定了外源蛋白在其中的表达水平参差不齐。目前，国内外为临床试验和基础研究提供的IL-10产品大多数为大肠杆菌表达的rIL-10，其活性不稳定和副作用较明显，价格也较贵，限制了rhIL-10的应用。多数酵母表达外源蛋白的产量较低[2]，为了进一步开发产量高、具有广泛用途的hIL-10生物制品，我们选择菌株X-33和SMD1168表达rhIL-10,以期找到合适hIL-10的表达菌株。

1 材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

1.2.1 rhIL-10的诱导表达及分析鉴定分别挑取重组酵母pPICZA-hIL-10/X-33、pPICZA-hIL-10/SMD1168形成的单个菌落接种到BMGY培养液中，30℃，300r/min振荡培养至OD600达到5.0，离心沉淀酵母细胞，在28℃，BMMY培养液中以终浓度为0.5%甲醇诱导培养48h后取培养液作SDS-PAGE。SDS-PAGE染色以外的凝胶以恒压100V电泳1h直接转移至PVDF膜。以5%脱脂奶粉封闭、TBST和TBS缓冲液漂洗后，加入Mouse Anti-Human IL-10作用1h，再加入羊抗鼠IgG-HRP作用1h，漂洗后进行发光反应和显影、定影及拍照。

1.2.2 rhIL-10在不同宿主菌的表达效率比较 以ELISA法分别测定48h时段30瓶pPICZA-hIL-10/X-33和pPICZA-hIL-10/SMD1168培养液的OD450，并进而换算为rhIL-10浓度，并以Bradford法检测同时段培养液总蛋白浓度，计算出rh IL-10占总蛋白的比例。……