李祥苏 熊光苏 吴叔明

·论著·

Jagged1基因沉默对人胰腺癌细胞SW1990和PANC1血管相关因子分泌及迁移能力的影响

李祥苏 熊光苏 吴叔明

目的以RNA干扰技术靶向沉默人胰腺癌细胞株Jagged1基因，观察细胞VEGF、Angiopoietin2、bFGF、MMP9的分泌及细胞迁移能力的变化。方法应用靶向Jagged1的siRNA、对照siRNA(c-siRNA)转染人胰腺癌细胞株SW1990和PANC1，实时PCR法和蛋白质印迹法检测细胞Jagged1 mRNA 和蛋白的表达， ELISA法检测细胞培养上清中VEGF、angiopoietin2、bFGF、MMP9的分泌量，Transwell小室观察细胞的迁移能力。结果SW1990和PANC1细胞均高表达Jagged1基因。15 nmol/L Jagged1 siRNA转染胰腺癌细胞72 h后，SW1990、PANC1细胞的Jagged1 mRNA表达被抑制，分别为c-siRNA组的(59.62±2.75)%和(76.96±6.16)%，Jagged1蛋白表达几乎完全被抑制。SW1990、PANC1细胞的VEGF分泌量均较c-siRNA组显著减少[(867.93±58.69)pg/ml比(1516.24±37.58)pg/ml，(951.13±120.49)pg/ml比(1413.68±33.56)pg/ml，P<0.05]，但angiopoietin2、bFGF、MMP9蛋白分泌无明显变化。另外，Jagged1 siRNA转染后，SW1990细胞VEGF mRNA表达水平为c-siRNA组的(52.26±4.85)%(P<0.05)；PANC1细胞为c-siRNA组的(59.75±4.91)%(P<0.05)。转染后的SW1990和PANC1细胞的穿膜细胞数分别为(65.25±5.56)、(57.50±8.58)个，较c-siRNA组的(122.25±11.09)、(112.00±12.52)个显著减少(P<0.05)。结论人胰腺癌细胞高表达Jagged1，沉默Jagged1基因可明显抑制人胰腺癌细胞VEGF的产生和分泌，并且可降低癌细胞的体外迁移能力。

胰腺肿瘤； Jagged1； 血管生成诱导剂； 血管内皮生长因子； RNA干扰

Jagged1是哺乳动物细胞膜上Notch受体的主要配体之一，除了能与Notch1结合，还可与Notch2及Notch3结合。Jagged1与相邻细胞表面的Notch胞外域结合，引起Notch胞内域的释放，然后转移到胞核与转录因子结合从而调控靶基因的表达。研究发现，Jagged1在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、骨肉瘤等肿瘤中表达增加，并与肿瘤的浸润转移、复发及肿瘤分化程度相关[1-4]。另外，Jagged1还是血管生长的调控因子，与血管的形成有密切关系。本实验观察Jagged1在人胰腺癌细胞株SW1990和PANC1中的表达及沉默Jagged1基因对癌细胞分泌血管相关因子及细胞迁移能力的影响。

材料和方法

一、细胞培养及分组

人胰腺癌细胞株SW1990和PANC1由上海市消化疾病研究所实验室保存，常规培养、传代。细胞以1×106个/孔密度接种于6孔板，加入不含抗生素的DMEM高糖培养基，待细胞密度达30%～50%时，分为对照siRNA(c-siRNA)组和Jagged1 siRNA(si-Jagged1)组。……