卫巍 徐凌 王锋 何珊珊 杨丽娟 郭传勇 王兴鹏

·论著·

IRX1在胰腺癌中的表达及其启动子区甲基化状态

卫巍 徐凌 王锋 何珊珊 杨丽娟 郭传勇 王兴鹏

目的检测胰腺癌的易洛魁族同源盒基因(IRX1)的表达及其启动子区的甲基化状态，探讨两者间的相关性。方法采用实时PCR法检测12例胰腺癌组织及6株胰腺癌细胞株的IRX1 mRNA表达。基因序列分析IRX1基因启动子区结构。应用甲基化抑制剂5- 氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理胰腺癌细胞，采用甲基化特异性PCR(MSP)、非甲基化特异性PCR(USP)及实时PCR检测处理前后IRX1启动子甲基化状态和IRX1 mRNA表达。结果胰腺癌组织IRX1 mRNA的表达量为0.31±0.11，显著低于癌旁正常胰腺组织的1.05±0.32(P<0.01)。胰腺癌细胞AsPC1、BxPC3、Capan-2、PANC1、PaTu8988和SW1990的IRX1 mRNA表达量分别为0.36±0.08、0.34±0.16、0.37±0.11、0.25±0.06、0.31±0.04、0.36±0.02，均显著低于人肾上皮293细胞的1.03±0.28(P<0.05或<0.01)。IRX1基因启动子区富含CpG岛。各胰腺癌细胞株IRX1基因启动子CpG岛对应位点均有甲基化，经5-Aza-dC处理后甲基化状态得以逆转，IRX mRNA的表达也得以恢复。结论胰腺癌的IRX1mRNA表达下降，与其IRX1基因启动子区CpG岛高甲基化状态相关。

胰腺肿瘤； 启动子； 甲基化； IRX1

易洛魁族同源盒(iroquois homeobox, IRX)基因最早在果蝇的神经系统发育研究中被发现，编码一个含高度保守同源盒序列的三氨基酸环延伸(three amino acid extension, TALE)超家族蛋白[1-2]。人类IRX家族成员共有6种，根据染色体的定位分为两簇，其中IRX1基因位于5号染色体短臂5p15.33区，该区域在多种肿瘤中均存在不稳定性[3-5]。 IRX1在头颈项肿瘤和胃癌的研究中常表达降低[6]，并与肿瘤的形态学和临床表型存在一定相关性。本研究测定胰腺癌、癌旁组织及各胰腺癌细胞株中该基因的表达水平，分析IRX1基因调控区的甲基化状态，为阐明其在胰腺癌发生及进展过程中的分子作用机制提供一定的实验依据。

材料与方法

一、材料

人胰腺癌细胞株AsPC1、BxPC3、Capan-2、PANC1、PaTu8988和SW1990为本实验室保存，常规培养，传代。待细胞生长到指数阶段时用终浓度为0.5 μmol/L的5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-dC)处理5 d，以未干预的细胞作为对照组，收集各组对数生长期细胞。……