王营 刘世育 费素娟 陈复兴 刘军权

·短篇论著·

γ-氨基丁酸、印防己毒素对γ δT细胞表面受体表达及对胰腺癌细胞杀伤力的影响

王营 刘世育 费素娟 陈复兴 刘军权

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid, GABA)是中枢神经系统一种主要的抑制性神经递质，不仅存在于中枢神经系统，而且广泛存在于外周神经组织及非神经组织的细胞中[1]。研究发现，CD4+和(或)CD8+T淋巴细胞上表达GABA的A受体，GABA与其结合能够抑制抗原特异性T细胞活化，具有免疫抑制作用[2]。γ δT细胞是固有免疫的一个重要细胞群，广泛分布于消化系统和呼吸系统上皮组织内,末梢血中也有一定的数量。γ δT细胞对多种肿瘤细胞系具有杀伤作用[3-4]。本实验应用GABA及其A受体拮抗剂印防己毒素(picrotoxin,PTX)诱导人γ δT细胞，观察诱导后γ δT细胞表面受体的表达和对SW1990细胞的杀伤力，探讨其机制。

一、材料与方法

1．细胞的培养：取健康献血者末梢抗凝血10 ml,加入淋巴细胞分离液，2000 r/min离心15 min，吸取单个核细胞层，生理盐水洗涤3遍后加入RPMI1640培养液(含10%小牛血清、5%人AB血清、IPP 3 ng/ml和IL-2 100 IU/ml)中常规培养。收集培养10 d的γ δT细胞。人胰腺癌细胞株SW1990购于中国科学院上海细胞生物学研究所，常规培养传代。

2．流式细胞仪检测表达表面受体γ δ-TCR和NKG2D的γ δT细胞：取培养10 d的γ δT细胞1×109个/L接种于96孔板,每孔0.2 ml 。培养24 h后分为200、800、3200 μmol/L GABA组，100 μmol/L PTX组和GABA(200 μmol/L)+PTX(100 μmol/L)组,每组分别加入荧光标记的抗人TCR -γδ-FITC单抗、抗人NKG2D-PE抗体(法国Immunotech公司)，终浓度为5 μg/ml,以不加抗体作为对照组，4℃避光孵育20 min,PBS液洗涤,然后用流式细胞仪检测。

3．LDH法检测γ δT细胞对SW1990细胞的杀伤率：将上述各组γ δT细胞与SW1990细胞数按10∶1比例混合作为测定管，同时设靶细胞自然释放管(SW1990细胞+0.5%BSA-RPMI164)及最大释放管(SW1990细胞+1%NP40),每组4个复管。……