文 进，李汉忠，纪志刚，严维刚，石冰冰

中国医学科学院 北京协和医学院 北京协和医院泌尿外科，北京100730

受体酪氨酸激酶 (receptor tyrosine kinases，RTKs)在浸润性膀胱尿路上皮癌发生、发展中起重要作用，是启动肿瘤细胞内造成癌进展、转移和治疗抵抗性等生物学特性的信号事件级联反应的关键。本研究采用实时定量PCR芯片和蛋白芯片，检测膀胱癌RTKs mRNA及蛋白表达，以发现有前景的生物标志物及可能的药物靶点，为将靶向药物治疗膀胱癌应用于临床提供实验依据。

材料和方法

RTKs实时定量PCR芯片检测

标本来源:实验组膀胱肿瘤组织取自手术切除的标本，直径为2 cm，术后经病理检查证实为高级别浸润性膀胱尿路上皮癌，侵犯深肌层，临床分期为T2bN0M0。对照组为经病理证实的、肿瘤旁2 cm以外正常膀胱组织。

总RNA抽提及鉴定:采用Trizol一步法抽提实验组总膀胱癌组织及对照组膀胱组织RNA，抽提的总RNA用分光光度法检测其量和纯度，测定260 nm波长的吸光度以定量，测定260 nm和280 nm波长吸光度的比值以确定纯度。

实时定量PCR:聚合酶激活/变性，95℃ 10 min;扩增40个循环，95℃ 15 s;60℃ 1 min，收集荧光。

阳性结果判断:Log2(FC)＞2或＜-2为差异表达基因。

RTKs蛋白芯片检测

选取RayBio人细胞因子抗体芯片试剂盒，X线胶片曝光后，将胶片上的图象用扫描仪扫描并转换为灰度TIFF格式的图片文件保存。运行ScanAlyze软件，将灰度TIFF格式图片的点阵转化为数字型数据，将此原始数据储存为Microsoft Excel文件。

结 果

筛选出的RTKs差异表达基因TGFA、STAB1、SERPINE1、ANGPT2、 SPINK5、 ANGPTL1、 PROK1、MDK、CXCL9、GRN、RUNX1、VEGFA、TGFB1在膀胱癌组织中的表达显著上调，EDIL3、PTN、CCL2、PDGFD、FGF13、 KITLG、 FGF2、 SERPINF1、 TNF的表达显著下调 (图1)。

筛选出的……