何鸿举，樊明涛,*，刘晓娇，吕丽娟，焦凌霞

(1.西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100；2.河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003)

扩展青霉DNA提取及PCR检测条件的优化

何鸿举1，樊明涛1,*，刘晓娇1，吕丽娟1，焦凌霞2

(1.西北农林科技大学食品科学与工程学院，陕西 杨凌 712100；2.河南科技学院食品学院，河南 新乡 453003)

研究扩展青霉DNA的提取及其聚合酶链式反应(polymerase chain reaction，PCR)检测条件的优化。分别采用玻璃珠法、氯化苄法、玻璃珠+氯化苄法提取扩展青霉菌及对照菌株的基因组DNA，经紫外测定和电泳检测实验，分析提取DNA的质量浓度和纯度；同时，根据扩展青霉多聚半乳糖醛酸酶基因内一段保守序列设计合成一对288bp的扩增引物，并对PCR检测条件进行优化。结果表明：玻璃珠+氯化苄法提取到的DNA质量浓度和纯度较理想，扩展青霉DNA可获得良好的特异性扩增，PCR扩增的最适退火温度为53～59℃，最适引物浓度为0.04～0.16μmol/L，最适模板质量浓度为2.40～5.28μg/mL，dNTPs浓度对PCR扩增影响不大。运用实验所得优化参数检测扩展青霉菌，整个过程仅需3～4h，和传统的培养检测法相比，该方法可有效提高检测效率，可进一步将该方法应用于实践。

扩展青霉；基因组DNA；聚合酶链式反应(PCR)；优化

目前，我国是世界上最大的苹果生产国，同时也是苹果汁生产第一大国，其浓缩苹果汁出口量已占到世界贸易量的60%[1]，但由于我国的苹果汁生产原料主要是残次落果，加之贮藏加工能力不足，导致大量的苹果出现腐烂，致使扩展青霉的污染比较严重，直接影响了苹果汁的质量[2-3]。……