卢艳 赵恒 闫红岩 司红丽 何成强 山东师范大学生命科学学院，济南 250014

新城疫病毒LaSota疫苗株全基因克隆和序列分析

卢艳 赵恒 闫红岩 司红丽 何成强 山东师范大学生命科学学院，济南 250014

本文通过RT-PCR的方法对家禽所的新城疫病毒LaSota疫苗株的全长进行分段克隆，通过测序获得全长序列，该病毒全长为15186bp，将全长序列提交到NCBI GenBank中获得序列登录号为JF950510，将其与之前已提交到NCBI GenBank中的LaSota株全长序列（登录号为AF077761）比较，核苷酸序列有135处变异，各个蛋白的氨基酸序列总共有61处变异。全基因克隆和序列分析为下一步研究LaSota株提供一个良好的方法。

RT-PCR;新城疫病毒;基因组序列

新城疫( Newcastle disease, ND)是由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一种烈性病毒性传染病，是当今全球范围内最严重的家禽传染病之一[1]。包含6个基因，依次为3’-N P-P-M-FH N-L-5’，分别编码核衣壳蛋白（nucleocapsid protein，NP）、磷蛋白（phosphoprotein，P）、基质蛋白（matrix protein，M）、融合蛋白（fusion protein，F）、血凝素-神经氨酸酶（hemagglutininneuraminidase，HN）、大聚合酶蛋白（large polymerase protein，L）[2]。本研究对其基因组序列进行测定，这对我国NDV开展分子流行病学和跨种间致病研究提供科学资料，为今后研制有效的NDV疫苗奠定基础。

1 材料和方法

1.1 病毒及分子生物学相关材料

Ⅳ系La Sota是山东省农科院家禽所袁小远老师惠赠的。SPF（specific pathogen free，无特定病原体）鸡胚购买于山东省农科院。p M D 18-T，T 4连接酶购买于TaKaRa公司， E.coli DH5 α为本实验室保存，DNA纯化回收试剂盒购买于天根公司。

1.2 病毒的纯化与收集：用PBS稀释La Sota疫苗然后接种于9～11日龄的SPF鸡胚中扩增并收集病毒，并通过血凝实验测得病毒效价为9。

1.3 引物设计：根据GeneBank上公布的全基因组序列将全长分别分12段扩增La Sota株基因组，使用primer5设计每个片段的上下游引物。……