陈 昊,陈乃玲,张春芳,张 昶,王红霞*,赵文海

(1.连云港市第一人民医院,江苏连云港222002;2.北京军区总医院全军肝病治疗中心)

研究证实凋亡与肿瘤发生发展密切相关,但是内外凋亡通路中各凋亡调控蛋白与肿瘤恶性增殖的关系尚不甚明了。我们以原发性肝细胞癌(肝癌)作为观察对象,研究 Caspase8、Bid 、Bcl-2、Bax、Cyt-C 和Caspase9等凋亡相关蛋白、基因在肝癌细胞的表达,并探讨其临床应用价值。

1 材料与方法

1.1 材料来源 标本来自连云港市第一人民医院病理科存档和尸检蜡块,诊断均经病理证实。肝癌组:50例,男 41例、女 9例,年龄 33-74岁、平均(52.84±9.15)岁。其中高分化组8例,中分化组35例,低分化组7例;参照Edmondson分级法进行病理分级[1],其中Ⅰ级4例,Ⅱ级24例,Ⅲ级22例。对照组:正常肝脏组织标本 30例,男 17例、女13例,年龄4-71岁、平均(41.53±18.20)岁。所有组织标本均经10%中性福尔马林液固定,石蜡包埋,4 μ m厚切片。

1.2 试剂 Bax兔抗人多克隆抗体;人 Caspase8 mRNA,Bid mRNA,Bcl-2 mRNA,Cyt-c mRNA和Caspase9 mRNA原位分子杂交试剂盒;免疫组化二抗试剂盒均购自武汉博士德生物有限公司。

1.3 免疫组织化学和原位分子杂交 免疫组织化学和原位分子杂交染色均按照试剂说明书操作,以PBS代替一抗作为空白对照。结果判定及分析:采用半定量积分法判断结果,具体操作如下:每张切片随机选取10个高倍镜视野,分析其阳性细胞数及着色强度。①阳性细胞百分数计分:阳性细胞数≤5%为0分,6%-25%为1分,26%-50%为2分,51%-75%为3分,＞75%为 4分;②着色强度积分,无色为0分,淡黄色为1分,黄色为2分,棕黄色为3分。将①和②两者积分相乘得到总积分,0分为阴性(-),1-4分为弱阳性(+),5-8分为阳性(++),9-12分为强阳性(+++)。……