于金海,刘国辉

(吉林大学白求恩第一医院1.胃肠外科;2.急诊科,吉林 长春130021)

近几年的研究显示通过抑端粒酶活性,干预端粒酶的激活过程,阻断肿瘤细胞的亚性转化,在肿瘤治疗上有重要意义和巨大的潜力[1]。本研究通过端粒酶抑制剂3-叠氮脱氧胸苷(3-azido-deoxythymidine,AZT)作用于人胃癌细胞SGC7901,比较AZT作用后癌细胞端粒酶活性的变化,并利用缺口末端标记技术【terminal deoxyribonucleotidyl transferse(TdT)-mediated biotin-16dUTP nick end labeling,TUNEL】和流式细胞术检测AZT作用后肿瘤作用后胃癌细胞SGC7901凋亡情况,进而探讨AZT抑制肿瘤细胞端粒酶可能的机制,为端粒酶抑制剂的临床应用奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞

人胃癌细胞株SGC7901及其培养基由中国医学科学院肿瘤医院提供。

1.2 主要试剂和仪器

AZT为德国默克公司产品;1250胰蛋酶为罗氏诊断产品(上海)有限公司产品;新生牛血清购自武汉达邦生物科技有限公司;注射用青霉素钠购自山东鲁抗医药股份有限公司;注射用硫酸链霉素购自大连美罗大药厂;PBS购自武汉博士德生物公司;DMSSO购自广州新港化工有限公司;DEPC购自上海生物工程技术服务有限公司;SYBR Green I荧光染料购自上海物工程技术服务有限公司;端粒酶活性检测试剂盒(TRAP-ELISA)为Sigma产品;细胞凋亡检测试剂盒购自BoehringerMannheim公司;Annexin V-FITC试剂盒购自 Beckman Coulter公司;美国Bio-Rad公司的icycleriQ实时荧光定量PCR仪;德国Leica的DMR+Q550病理图像分析仪;美国Becton Dickinson,FACS Calibur流式细胞仪;

1.3 细胞培养液及细胞毒性实验(MTT法)

具体操作方法参见文献[2]。实验组为AZT处理的胃癌细胞SGC7901,对照组为不加任何处理因素的胃癌细胞SGC7901。MTT作用浓度分别为:2 mmol/L,4 mmol/L,8 mmol/L,16 mmol/L,32 mmol/L,作用时间分别为:12 h,24 h,36 h,48 h。……