于庆功,郑清华,李明强,舒 敏,王 伟,刘春英

(大连大学附属中山医院消化科,辽宁大连116001)

在我国,绝大部分胃癌患者就诊时已属晚期,其治疗难点之一是如何预防和治疗肿瘤的转移。脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)是B细胞信号转导途径中重要的激酶,与T细胞的ZAP-70属于同一个PTK家族,在T细胞和B细胞的成熟、活化、免疫应答的过程中起关键作用[1]。有研究认为Syk不但是免疫调节因子,对恶性肿瘤的生长和转移也可能有抑制作用[2]。国内外研究已证实,Syk能够抑制乳腺肿瘤细胞的生长和转移,Syk基因的表达降低或缺失与正常乳腺组织向恶性细胞发展有关[3]。有研究认为Syk基因是胃癌的抑制基因[4],其表达缺失与胃癌的发生以及转移相关,但其缺失的原因至今未明。抑癌基因启动区CpG岛(基因启动子内含有的CpG,C-G相邻,p为二酯键)的甲基化是抑癌基因表达缺失的主要原因之一[5],而甲基转移酶(DAN methyltransferase enxyme,DNMT)抑制剂 5-氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CDR)具有逆转SYK基因甲基化的作用[6]。为了进一步研究Syk基因的表达对胃癌的生物学作用,本研究拟探索5-氮2'-脱氧胞苷(5-aza-CDR)能否逆转人胃癌SGC-7901细胞株Syk基因的甲基化,激活的Syk基因是否对胃癌的生长及血管内皮生长因子(VEGF)的表达有抑制作用,从而探讨Syk基因抑制胃癌的可能机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人胃癌SGC-7901细胞株购自中国科学院上海生化所;5-氮-2'-脱氧胞苷(5-aza-CDR)购自美国Sigma公司,用含氯化钠的磷酸盐缓冲液(pH6.8)配制成贮存液,-70℃保存。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 人胃癌SGC7901细胞株常规培养于含10%小牛血清,100 IU/ml青霉素和100 μ g/ml链霉素的RPM1640培养液中,于37℃,5%CO2培养箱中培养。……