方 芳,邢 影,徐忠信,郑昭石,张 爽

(吉林大学中日联谊医院神经内科,吉林长春130033)

酸敏感离子通道是一类位于细胞膜上的阳离子通道,近年来有研究已经表明在脑缺血的过程中伴有酸敏感离子通道的激活[1]。引起酸敏感离子通道激活的原因主要由于细胞外的pH值的降低,而酸中毒是脑缺血发病过程中的主要病理机制。本研究在前期实验中已经证实糖尿病合并的局灶脑缺血氧化应激反应较单纯脑缺血时明显增强,而Xiang-Ping Chu[2]等人的研究发现ASIC1a的胞外段有氧化及还原结合位点,因此我们推测在糖尿病局灶脑缺血时可能伴有ASIC1a开放的增加。为了验证此假说并观察其在不同缺血时间时的变化规律,我们进行如下实验。

1 材料与方法

1.1 实验动物、分组及主要试剂、仪器

雄性Wistar大鼠72只,体重在220-240 g(由吉林大学基础医学院动物实验中心提供)。

分组:糖尿病组32只,正常组40只;根据局灶脑缺血时间分为正常假手术组,单纯缺血1 h,3 h,6 h,24 h,糖尿病局灶缺血1 h,3 h,6 h,24 h,每组8只;共 9 组 。

主要试剂、仪器:STZ(Sigma,美国),ASIC1a(一抗Santa,美国)血糖仪、血糖试纸(美国罗氏),水合氯醛(上海亚培生物有限公司,上海),重组人胰岛素(美国礼来),TTC、柠檬酸缓冲液、DAB显色试剂盒、羊抗兔 IgG(二抗)(博士德,武汉),照相显微镜(Olympus,日本),超速离心机(OptimaTM LE-80K,美国),凝胶分析系统(Biotech,美国)

1.2 模型建立

(1)糖尿病大鼠模型建立及评价

高脂饮食4周后,参考文献[3]并按照试剂说明,制备pH=4.2的柠檬酸缓冲液。按30 mg/Kg称取STZ,溶于柠檬酸缓冲液中,快速腹腔注射。7天后尾静脉取血,测空腹血糖≥16.7 mmol/L为造模成功。……