张 秀 云， 吴 斌， 肇 慧 君， 贾 赟， 刘 霞， 张 瑞

( 1.大连工业大学 生物工程学院， 辽宁 大连 116034;2.辽宁出入境检验检疫局， 辽宁 大连 116001;3.河南农业大学 牧医工程学院， 河南 郑州 450002 )

0 引 言

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome, PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV)。近年来，PRRS在我国存在不同程度的流行，造成严重的经济损失[1]。自PRRSV在北美发现以来，围绕其准确诊断与疫苗的研究不断深入。但由于PRRSV基因组具有较大的变异性[2]，为研究带来一定的难度。

PRRSV系单股正链RNA病毒，该病毒的基因组长约15 kb。PRRSV的核衣壳N蛋白最为保守，是该病毒免疫原性最强的结构蛋白[3]，也是目前进行PRRS诊断的抗原基础。感染PRRSV后的早期免疫应答主要是针对N蛋白的，对其产生的抗体持续时间也最长，N蛋白以其强大的免疫性和相对的保守性成为现行诊断试验的抗原基础，也是研制重组诊断抗原的首选靶抗原[4]。

本实验对PRRSV的N蛋白基因(ORF7)[5]进行克隆、测序鉴定、原核表达及纯化，纯化后的重组蛋白和PRRSV阳性血清进行免疫学印迹试验(Western-blotting)，验证表达蛋白的免疫学活性，为下一步血清学检测方法的建立和诊断试剂盒的研制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 细胞、质粒、菌种与毒株

Marc-145细胞及PRRSV ATCC VR2332标准毒株冻干样品由辽宁出入境检验检疫局动检实验室提供；pET-28a(+)、Ni-NTA His Bind Resis购自Novagen公司；感受态细胞DH5α、BL21(DE3)宿主菌、pMD18-T载体均购自大连宝生物公司；巴氏小鼠购自大连医科大学实验动物中心。

1.2 试 剂

DMEM培养基为GIBCO公司出品；新生犊牛血清购自杭州四季青公司；Taq DNA聚合酶、限制性内切酶、反转录酶AMV购自大连宝生物公司；……