顾 艳 丽， 张 慧， 刘 赛 男， 李 宪 臻

( 大连工业大学 生物工程学院， 辽宁 大连 116034 )

0 引 言

近年来，碱性蛋白酶作为工业催化剂得到广泛使用。与传统的化学催化剂相比，碱性蛋白酶具有催化能力强、底物专一性高等优点，已被应用于制革、银回收、医药、食品、饲料、化学工业、废物处理等生产及行业[1]，尤其是作为无磷洗衣粉的添加剂使用，已使碱性蛋白酶商业制剂的销售占整个蛋白酶市场的1/3以上，显示出良好的使用性能和经济价值。但国产碱性蛋白酶己不能满足洗涤剂工业发展的需求，大规模工业用碱性蛋白酶主要依赖于国外进口。因此，寻找一种能分泌具有良好酶学特性并适用大规模洗涤剂工业生产的碱性蛋白酶高产菌种，具有重要的理论意义和应用价值。本研究在前期菌株筛选的基础上对筛选出的产碱性蛋白酶菌株I13进行产酶条件的响应面[2]优化，最终确定了该菌株较佳的产酶条件。

1 材料与方法

1.1 菌 株

实验室前期工作分离筛选获得的保藏菌种。

1.2 培养基

种子培养基：蛋白胨0.5 g，酵母粉0.5 g，干酪素0.1 g，葡萄糖1 g，氯化钠1 g， 0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 10.5) 100 mL，灭菌后用5 mol/L氢氧化钠调pH至10.5。

基本发酵培养基：葡萄糖1 g，酵母粉1 g，氯化锰0.05 g，干酪素0.1 g，氯化钠1 g，0.1 mol/L磷酸盐缓冲液(pH 10.5) 100 mL，灭菌后用5 mol/L氢氧化钠调pH至10.5。

1.3 培养方法

种子培养：将实验室的保藏菌种接一环到种子培养基中，于20 ℃、160 r/min的条件下进行振荡培养，取OD600=0.15的发酵液作为种子液。

发酵培养：取种子培养液以5%接种量接入发酵培养基，20 ℃、160 r/min振荡培养36 h，离心取上清液即为粗酶液。……