汪 茗， 章 尧， 戚之琳， 毕富勇

(皖南医学院生化教研室，安徽芜湖241002)

蜂胶(propolis)是蜜蜂从植物幼芽及树木枝条上采集树脂类物质，与其唾液混合加工而成的一种芳香性胶状固体物，含有黄酮、萜烯、肉桂酸衍生物等300多种成分。蜂胶作为民间药物，对于炎症、肿瘤[1]、心脏病[2，3]等均具有治疗或预防作用。核孔复合物贯穿于核膜，是胞核与胞质物质交换的唯一通道，在细胞正常生长、分化过程中发挥着重要作用。其中核孔蛋白98(nucleoporin 98，Nup98)是与白血病发病关系最密切的核孔蛋白。本研究通过观察蜂胶对K562细胞Nup98表达的影响来探讨蜂胶抗白血病作用的分子机制。

材料和方法

1 材料

1.1 细胞株 人慢性粒细胞白血病K562细胞购自中科院上海细胞生物研究所。

1.2 试剂 蜂胶标准品购自Anksteh，用组织培养级的DMSO配成1×105mg/L的贮存液，用时稀释，使DMSO终浓度≤0.1%。PCR引物由上海生工合成。Annexin V－FITC细胞凋亡检测试剂盒购自南京凯基生物。鼠抗人Nup98单克隆抗体、HRP标记羊抗鼠Ⅱ抗购自Santa Cruz。

2 方法

2.1 分组 分对照组和蜂胶0.2、2、20、200 mg/L组。每组设3个复孔，重复3次，取均值。

2.2 细胞培养 采用含10%胎牛血清的培养液，于37℃、5%CO2、饱和湿度环境下培养。将不同浓度的蜂胶掺入细胞，孵育一定时间后收集细胞进行后续实验。

2.3 MTT检测 取对数生长期细胞，调整浓度为1×108/L，接种于96孔板。蜂胶作用24、48、72 h后取出培养板，每孔加入MTT(5 g/L)20 μL，37℃继续培养4 h后，离心弃上清，加DMSO 150 μL，振荡后酶标仪570 nm下测定各孔的吸光度(absorbance，A)值，按下式计算抑制率。抑制率(%)=(A对照－A实验)/A对照×100%。

2.4 流式细胞术(flow cytometry，FCM)检测 蜂胶作用24 h后收集细胞，Annexin V/PI双染，按说明书处理，1 h内上机检测细胞凋亡率。……