张 磊， 赵翠芬△， 李福海， 王 荣， 夏 伟

(山东大学1齐鲁医院儿科，2卫生部教育部心血管功能重塑与功能研究重点实验室，山东济南250012)

肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells，PASMCs)肥大、增殖，胶原等细胞外间质在肺血管壁沉积导致肺血管壁增厚、管腔狭窄是肺血管重构主要的病理生理改变之一[1]。肾上腺髓质素(adrenomedullin，ADM)是一种血管活性多肽，ADM前体(proadrenomedullin，proADM)在体内经内源性肽酶的作用可以降解产生4个不同的活性肽段，各肽段在肺内的分布和作用不同[2]，其中ADM可扩血管、抑制平滑肌细胞增殖和迁移，肾上腺加压素(adrenotensin，ADT)可收缩血管、升高血压和促进血管平滑肌细胞增殖和迁移[3]。丝裂原活化蛋白激酶(mitogen－activated protein kinases，MAPKs)是各种刺激引起细胞增殖的细胞内信息传递的共同通路，研究发现细胞外信号调节激酶(extracellular signalregulated kinase，ERK)参与了高肺血流大鼠肺血管重构的形成过程[4]。本研究探讨ADM和ADT对培养的Wistar大鼠PASMCsⅠ、Ⅲ型胶原合成及磷酸化ERK1/2(p－ERK1/2)表达的影响，揭示ADM和ADT调节PASMCs增殖的可能机制。

材料和方法

1 材料

1.1 仪器和试剂 4周龄雄性Wistar大鼠(重约100 g)，购自山东大学医学院实验动物中心。山羊抗小鼠－TRITC和山羊抗小鼠－FITC(Sigma)，小鼠抗人平滑肌α－actin单克隆抗体(R＆D)，ADM和ADT(北京中杉)，兔抗大鼠Ⅰ型、Ⅲ型胶原抗体和兔抗大鼠p－ERK1/2抗体(北京博奥森)。实验用仪器、设备及其它试剂均由山东大学教育部和卫生部心血管重构与功能研究重点实验室提供。

1.2 试剂配制 D－Hanks平衡盐溶液:称取 KCl 0.4 g、KH2PO40.06 g、NaCl 8.0 g、NaHCO30.35 g、Na2HPO4·12H2O 0.134 g和酚红0.01 g溶解于三蒸水1 000 mL中，调pH值至7.2－7.4，过滤除菌，分装后4℃保存。PBS缓冲液:称取8.0 g NaCl、0.2 g KCl、1.15 g Na2HPO4·7H2O 和 0.2 g KH2PO4溶解于1 000 mL三蒸水中，调pH值至7.3，过滤除菌，分装后4℃保存。以上试剂经0.22 μm滤膜过滤除菌。……