陈兆波， 刘春艳， 倪娜娜， 于 洋， 张鹏举， 陈蔚文， 崔福爱， 姜安丽

(山东大学医学院生物化学与分子生物学研究所，山东济南250012)

NKX3.1是前列腺特异性和雄激素调控的同源框基因[1]，它与前列腺的发育、成熟[2，3]及前列腺癌的发生发展密切相关[4]。NKX3.1基因位于染色体8p21区域[5]，基因全长约 4 223 bp，具有 2 个外显子，1个内含子，编码234个氨基酸，其表达产物属于核转录因子。大约80%的前列腺癌细胞会杂合缺失该区域[6，7]，它的表达缺失与前列腺癌的发生发展有关，而且决定了肿瘤发生的组织特异性，这表明NKX3.1可能是一种潜在的抑癌基因[8]。研究认为NKX3.1蛋白可能是通过激活caspase凋亡途径，及诱导凋亡抑制基因bcl－2的表达，起到诱导前列腺癌细胞凋亡的作用[9]，但NKX3.1在前列腺癌发生发展中的确切作用机制仍不清楚。本实验将NKX3.1真核表达载体pcDNA3.1－NKX3.1转染前列腺癌PC－3细胞，研究NKX3.1对抗凋亡基因bcl－2表达的影响及对前列腺癌细胞凋亡的作用，为进一步研究NKX3.1在前列腺肿瘤中的作用奠定基础。

材料和方法

1 主要材料

pcDNA3.1载体、Trizol试剂和质粒抽提试剂盒购于Invitrogen;Taq酶和PCR试剂盒购于大连宝生物工程公司;M－MuLV逆转录酶和快速凝胶回收试剂盒购于Fermentas;大肠杆菌JM109由本室保存;NKX3.1真核表达载体pcDNA3.1－NKX3.1由本课题组克隆构建[9];前列腺癌PC－3细胞株购于中科院上海细胞所;鼠抗人Bcl－2购于Santa Cruz，羊抗鼠IgG购于北京中衫金桥;RPMI－1640培养基购于HyClone;胎牛血清购于四季青公司;其余为国产分析纯。

2 方法

2.1 细胞培养 前列腺癌PC－3细胞生长于含有10%胎牛血清、1×105U/L青霉素及1×105U/L链霉素的RPMI－1640培养基，在37℃、5%CO2条件下培养。……