朱 嫦， 杨雅莹， 易永芬

(重庆医科大学病理教研室，分子医学与肿瘤研究中心，重庆400016)

胃癌是全世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，高居癌症死因的第2位[1]。探讨胃癌侵袭和转移的相关机制并对其进行有效防治是长期以来的研究热点。细胞表面糖蛋白的糖链结构尤其是N－聚糖的改变与肿瘤的恶性生物学行为密切相关[2－4]。高尔基体α－甘露糖苷酶Ⅱ(Golgi mannosidaseⅡ，GMⅡ)是N－聚糖形成中的关键性糖苷酶之一，其被特异性抑制后肿瘤细胞的生长和转移明显降低，因此GMⅡ可能成为抗癌治疗的重要靶点[5－7]。GMⅡ在胃癌中的作用和意义国内外文献均少见报道，本研究通过RT－PCR、免疫组织化学和Western blotting等方法分别检测GMⅡ基因和蛋白在不同分化胃癌细胞系和组织中的表达，初步探讨GMⅡ与胃癌的关系，为进一步研究GMⅡ在胃癌发生和发展中的作用奠定基础。

材料和方法

1 材料

1.1 主要试剂 RPMI－1640培养基干粉、DEPC水和DMSO购自Sigma。小牛血清、胰蛋白酶购自Hy-Clone。SP免疫组化试剂盒及DAB染色试剂盒购自北京中杉金桥生物技术公司。Trizol购自Invitrogen。RT－PCR试剂盒和DNA marker购自宝生物工程大连有限公司。蛋白裂解液、BCA蛋白质定量试剂盒和蛋白marker购自碧云天生物技术公司。PVDF膜购自Millipore。MAN2A1(人GMⅡ基因)羊抗人多克隆抗体购自Santa Cruz。化学发光试剂盒购自天根生物技术有限公司。兔抗人β－actin多抗、HRP标记兔抗羊IgG和HRP标记羊抗兔IgG购自北京中杉金桥生物技术公司。

1.2 组织和细胞来源 收集2008年10月－2010年10月重庆医科大学附属第一医院胃癌患者手术切除标本，所有病例术前均未接受放化疗。其中癌组织38例，正常癌旁胃黏膜组织30例(癌旁5cm以上)。……