杨立明 姜文平 姜文华 (吉林大学第一医院肾内科，吉林 长春 300)

肝癌是世界上最常见的肿瘤之一，死亡率居第三，并且其发病率还在逐年上升〔1〕。目前虽然治疗方法很多，但效果都不理想，临床效果差，死亡率高〔2〕。国内外近年的研究表明稀土化合物具有明显的抑瘤性能〔3～5〕。但有关稀土化合物对肝癌细胞周期影响的研究报道非常少见。本实验以稀土化合物在体内外均有明显的抑瘤性能为理论基础，以大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象，探讨稀土化合物三氯化镧(LaCl3)是否能阻抑CBRH-7919细胞的异常调控，从而阻止肿瘤的进一步发展，阻止肿瘤的浸润和转移。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 LaCl3由北京稀土农用中心提供;DMEM培养基、小牛血清、胰酶、四甲基偶氮唑蓝(MTT)均为Gibco公司产品;RNA酶、碘化丙啶(PI)为Sigma公司产品;细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)和P21免疫细胞化学试剂盒为Santa Cruz公司产品，其余试剂为国产分析纯。

1.1.2 细胞株 大鼠肝癌细胞株CBRH-7919，购于中科院上海细胞库。

1.2 方法

1.2.1 分组 实验分为3组;对照组:CBRH-7919培养在含10%小牛血清的DMEM培养液中;实验组分为两组:CBRH-7919细胞分别培养在含0.10和1.00 mmol/L LaCl3的DMEM培养液中。培养时间分别为1、3、5 d。

1.2.2 流式细胞术(FCM) 每组收集细胞5×106个，固定于70%冷乙醇中，4℃过夜。加入0.01%RNA 酶 10 ～15 μl，37℃水浴30 min，加0.25%PI染色剂(避光)染色30 min，作流式细胞仪检测。每组随机检测1×105个细胞，计算各期细胞比例。

1.2.3 MTT实验 CBRH-7919细胞，培养在96孔培养板中(每孔含3×103个细胞)12 h后，分别加入含不同剂量的LaCl3的DMEM培养液。分别培养1、3、5 d。在上述各时间点作用结束前4 h每孔加 MTT(5 g/L)20 μl。培养结束后，每孔加入DMSO 溶液 100 μl，作用 10 min，用酶标仪(波长 570 nm)测定各孔吸光度值(OD值)。……