李 勇，高 洪，严玉霖，杨桂梅，彭 洁，孔令青，刘海峰

(1.云南农业大学动物科学技术学院，云南昆明650201；2.云南省药物研究所GLP中心，云南昆明650111；3.昆明医学院，云南昆明650031；4.云南农业职业技术学院，云南昆明650212)

内毒素(Endotoxin，ET)是革兰氏阴性细菌(Gram negative bacteria，GNB)细胞壁外膜的组成成分，其化学本质为脂多糖(LPS)，它作为GNB的主要致病因子，在GNB感染中发挥着重要作用，常造成人畜ET血症和ET休克，严重危害人畜健康。肝脏既是清除ET的场所，同时又是ET血症、休克过程中最易受损的器官之一[1]。近年来研究表明，细胞凋亡与肝损伤有着密切的联系，在许多肝脏疾病中均有细胞凋亡的发生，它往往通过直接或间接的途径造成肝脏损伤。Fas/FasL系统是目前研究较为深入的一类与凋亡有关的基因系统，而由Fas基因表达的Fas蛋白是一种促凋亡蛋白[2-4]。大量研究表明，Fas/FasL途径是肝细胞的主要凋亡路径[5-8]。而肝细胞凋亡是造成肝损伤的原因之一，Erwei等[9]利用RNA干扰(RNAi)技术，使Fas蛋白表达沉默，凋亡减少，保护肝细胞免受细胞毒性作用，从而避免肝脏受损。而ET能够有效地促进肝细胞凋亡，从而造成肝损伤[10-11]。但在此过程中，ET对大鼠肝细胞Fas蛋白表达的影响尚未见报道。本实验通过建立ET致大鼠肝脏损伤模型，应用western blot和流式细胞术(FCM)，探讨ET对大鼠肝细胞Fas蛋白表达的影响。

1 材料和方法

1.1 主要试剂、实验动物与仪器 大肠杆菌O111∶B4内毒素(L2630)购自美国Sigma公司；Fas兔多克隆 抗 体(BA0484)、HRP-羊 抗 兔 IgG(BA1054)、β-Actin鼠单克隆抗体(BM 0627)、HRP-羊抗鼠IgG(BA1050)均购自武汉博士德生物公司；异硫氰酸荧光素(FITC)-羊抗兔IgG(ZF-0311)、浓缩型DAB试剂盒(ZLI9017)均购自北京中杉金桥生物技术有限公司；……