曾宪斌，熊永忠，贾 坤，张敦伟，佘利旋，夏惠焰，远立国，李守军*

(1.华南农业大学兽医学院，广东广州510642；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江哈尔滨150069)

犬布氏杆菌病(Canine Brucellosis)是由犬布氏杆菌(Brucella canis)引起的人畜共患传染病。B.canis为粗糙型布氏杆菌，革兰氏染色阴性。1966年Leland Carmichael首次分离到 B.canis。在我国，1984年尚德秋首次分离到B.canis。B.canis主要感染狗，还可以感染人、猴和兔。主要侵害宿主的生殖系统，引起感染宿主的不育，怀孕母畜流产，公畜附睾炎和前列腺炎，另外还可以引起全身性的淋巴结炎和眼葡萄膜炎。

犬布氏杆菌病的诊断方法有很多种，常用的有细菌分离培养、试管凝集试验(TAT)、玻板凝集试验、虎红平板凝集试验(RBPT)和琼脂免疫凝胶扩散试验(AGID)，但这些方法均存在一定缺陷。ELISA方法作为一种快速、敏感、特异的检测方法，是公认的较有效的布氏杆菌病(Brucellosis)检测方法。目前只有牛种和猪种布氏杆菌(Brucella)的ELISA试验是国际贸易中的指定试验。绵羊副睾种Brucella也已有成熟的ELISA诊断技术[1]。ELISA方法在检测B.canis上的应用还需进一步改进抗原和积累数据。Cu/Zn-SOD是Brucella除沙林鼠种和猪种Brucella生物2型外，各生物型均表达的一个蛋白，是建立B.canisELISA检测方法的候选抗原之一。本研究表达、纯化了B.canis重组Cu/Zn-SOD蛋白，并检测其免疫原性，为研究Cu/Zn-SOD蛋白在B.canis的ELISA检测中的应用奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料 B.canis及阴性犬血清由本实验室分离并保存；B.canis阳性血清由北京畜牧兽医研究所提供；pMD18-T Simple Vector、pET-28a(+)Vector、ExTaqDNA聚合酶、T4 DNA连接酶、EcoRⅠ、HindⅢ、DNA Marker均购自宝生物工程(大连)有限公司；……