抗蓝舌病病毒VP7和NS2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定
2011-08-06秦永丽孙恩成耿宏伟刘霓红王凌凤徐青元蔡绪禹李文京吴东来
秦永丽, 孙恩成,耿宏伟,2,杨 涛,刘霓红,赵 晶,王凌凤,徐青元,蔡绪禹,李文京,吴东来*
(1.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/农业部兽医公共卫生重点开放实验室,黑龙江哈尔滨150001;2.东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨150030;3.中国动物疫病预防控制中心,北京100125)
蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属的BT病毒(BTV)引起的,主要由库蠓传播的反刍动物烈性非接触性传染病,其主要感染牛、羊和野生反刍动物等[1]。感染动物的平均病死率为30%,其中绵羊的病死率可高达80%[2]。世界动物卫生组织(OIE)将BT列为必须呈报的传染病之一,我国将其划定为一类动物疫病。BTV血清型众多,目前已发现24个血清型,根据不同的地理位置又分为不同的亚型[3]。
BTV是双链RNA病毒,其基因组由10个线性双链RNA片段组成,共编码10种蛋白,包括7种结构蛋白(VP1-VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3和NS3a)。自2006年以来,BTV8在欧洲一些国家如比利时、荷兰、法国、德国等爆发,造成了严重的经济损失,同时也扩大了BTV的传统分布范围[4]。我国目前还未有BTV8流行的相关报道,但是随着国际贸易的往来,BTV8随时有可能传入我国。所以,本研究利用BTV8全病毒颗粒为免疫原免疫BALB/c小鼠制备了单克隆抗体(MAb),并通过western blot和间接免疫荧光(IFA)对其特性进行鉴定,为建立BTV免疫学检测方法和相关病毒蛋白功能的研究奠定基础。
1 材料和方法
1.1 细胞与病毒株 BHK-21细胞、SP2/0骨髓瘤细胞以及BTV1-24型病毒株由本实验室保存。
1.2 实验动物 6周龄~8周龄的BALB/c小鼠由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供。……
