中华鲟软骨抗肿瘤活性的实验研究
2011-08-28吕宝军谢小铭
吕宝军 谢小铭 谭 敏
1.中山大学附属第五医院普外II区,广东 珠海 519000;2.中山大学附属第五医院急诊科,广东 珠海 519000;3.中山大学附属第一医院微创外科,广东 广州 510080
自80年代开始,世界各国科学家,均深入研究了鲨鱼软骨的临床应用,并取得了令人瞩目的成就[1]。中华鲟昵称“水中熊猫”是一种在海洋中生长,在淡水中繁殖的大型海河洄游性软骨硬鳞鱼类,除了头部有几块膜化骨之外,全身都是软骨[2]。我们拟从中华鲟软骨分离得到中华鲟软骨活性制剂,通过体内体外实验对其抗肿瘤效应进行了初步的研究,为我国生物医药的发展及宝贵资源的发掘开辟了一条新路。
1 材料与方法
1.1 原料与试剂 中华鲟 (顺德市创世纪农业园馈赠)、Millipore超滤器 (5,000和100,000)(Amicon公司)、健康三级纯系 BALB/c-nu裸小鼠 (雌性、体重相近20±0.2g、约6-7周龄)(中山大学实验动物中心)、人结肠癌lovo细胞株 (中山大学实验动物中心)。
1.2 中华鲟软骨有效成分的抽提、分离和浓度的测定 剖取200g中华鲟软骨,将中华鲟软骨用组织粉碎机粉碎至匀浆,经400ml1M盐酸胍抽提48h,45% ~65%丙酮的分级沉淀,5,000分子量和100,000分子量的Millipore超滤器等步骤超滤得到中华鲟软骨溶液a(全成份)、中华鲟软骨溶液b(≥100,000分子量)、中华鲟软骨溶液c(5,000~100,000)三种溶液,通过Bradford法测定中华鲟软骨溶液蛋白质的浓度。
1.3 体外抑制血管生成作用的实验研究 (付生法[3])滤纸放入打孔器中制作直径1mm的滤纸片,高温高压消毒备用,将40只受精鸡蛋表面酒精消毒后放入37.8℃孵化箱,孵化至第7天时,暴露出绒毛尿囊膜,将已经……
