刘红亮,陈学忠,李克生,杜惠芬,陈应泰,连晓雯,鲁学萍,袁 明,叶文华

2.甘肃省医学科学研究院,兰州 730050;

3.兰州大学临床医学院,兰州 730030

肠出血性大肠杆菌O157∶H7脂多糖抗原的提取鉴定及间接ELISA法的建立

刘红亮1,陈学忠2,李克生2,杜惠芬2,陈应泰3,连晓雯2,鲁学萍1,袁 明2,叶文华2

目的提取并纯化具有强免疫反应性和高特异性的肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)脂多糖(LPS)抗原,并研究其在E.coliO157∶H7 LPS抗体检测中的应用。方法应用热酚水法提取E.coliO157∶H7 LPS抗原,同时收集水相和酚相LPS,并对其产率、纯度及免疫反应性进行分析比较,用酸解法制备O-特异性多糖(O-SP),并以不同的LPS为包被抗原,建立间接ELISA法检测E.coliO157∶H7 LPS抗体。结果大分子量的E.coliO157∶H7 LPS优先溶于酚相,而水相中含有更多的小分子量LPS,与水相LPS相比酚相LPS具有更高的免疫反应性和纯度,酚相LPS经酸解去脂得到的O-SP具有更高的反应特异性。结论酚相LPS和O-SP都可用于E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测,O-SP具有更高的特异性,是检测E.coliO157∶H7 LPS特异性抗体的理想材料。

大肠杆菌 O157∶H7;热酚水法;脂多糖;O-SP;间接 ELISA

2.甘肃省医学科学研究院,兰州 730050;

3.兰州大学临床医学院,兰州 730030

肠出血性大肠杆菌O157∶H7(E.coliO157∶H7)是一种严重危害人类健康的食源性病原菌,由于其具有高致病性和高毒力,近年来被公众所关注。脂多糖(LPS)是E.coliO157∶H7细胞壁的重要组成部分,由类脂A、核心多糖和O特异性多糖(OSP)组成,E.coliO157∶H7的特异性O抗原位于LPS的O-SP上。该菌感染患者,可诱导机体产生特异性抗O157抗体[1],LPS抗原可用于对E.coliO157的血清学诊断[2],另外E.coliO157 LPS也被广泛地应用于E.coliO157特异性单克隆抗体的制备[3-4]。制备高质量的E.coliO157∶H7 LPS抗原并建立灵敏度高、特异性强的针对E.coliO157∶H7 LPS抗体的ELISA检测方法是对该菌进行血清学诊断及制备E.coliO157∶H7 LPS特异性单克隆抗体的基础。……