毕振威 ，王永山，范红结

(1.江苏省农业科学院兽医研究所 农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室 国家兽用生物制品工程技术研究中心，南京 210014；2.南京农业大学动物医学院，南京 210095)

犬瘟热（canine distemper, CD）是由犬瘟热病毒（Canine distemper virus, CDV）感染犬、貂、浣熊和狐等食肉动物引起发病的一种致死性传染病。CDV弱毒疫苗的使用曾有效地防控了此病，但在过去的20年，犬瘟热疫情重新爆发和大规模流行，而且已跨越物种限制，感染海豹、海狮等水生动物和灵长类动物[1]。2008年中国大陆出现了人工饲养恒河猴感染并死于犬瘟热的病例[2]。

CDV属于副粘病毒科麻疹病毒属，病毒颗粒主要由核衣壳蛋白(nucleocapsid protein, N)、融合蛋白(fusion protein, F)、血凝或附着蛋白(heamagg lutinin protein, H)、基质膜蛋白(matrix protein, M)、大蛋白(large protein, L)和磷蛋白(phosphoprotein, P)构成[3]。N蛋白是具有免疫原性的主要结构蛋白，病毒感染早期，即可强烈刺激机体产生大量的特异性抗体[4]。在动物免疫功能低下，H蛋白和F蛋白的特异性抗体低于检测水平时，N蛋白的特异性抗体仍能被检测到[5]。因此，进行CDV血清学诊断时，尤其在CDV早期感染阶段，与病毒其它结构蛋白相比N蛋白是免疫学检测中理想的靶抗原。

CDV只有一个血清型，但存在CDV毒株之间因基因突变导致的抗原性差异[6-10]。本实验前期对引起免疫犬非典型临床症状的CDV NJ01的N基因进行了序列分析，并在大肠杆菌中表达[10]。由于犬血清中自然存在着大肠杆菌抗体，因此，用大肠杆菌表达的重组N蛋白用于CDV抗体ELISA检测时，需要进行严格的纯化，其推广应用有较大的局限性。鉴于此，本实验选用杆状病毒表达系统，将CDV NJ01的N基因在昆虫细胞中表达，探索该重组N蛋白抗原在CDV抗体检测中的应用前景。……