周春景，罗 荣，石耀军，丁 硕,2，杨德浩,3 ，程国锋

（1.中国农业科学院上海兽医研究所 农业部动物寄生虫学重点开放实验室，上海 200241；2.上海大学，上海 200444；3.河北北方学院，石家庄 075000）

Akt又称蛋白激酶B(protein kinase B, PKB)，在哺乳动物中，不同的Akt亚型都含有氨基末端PH结构域，富含甘氨酸的铰链区，中心激酶结构域和富含色氨酸/苏氨酸的羧基末端区组成[1,2]。

Akt通过磷酸化其下游蛋白分子，可调控细胞生长、发育、凋亡和增殖等多种生物行为[3]。早在十多年前，研究表明Akt通路过度活化是肿瘤发生的一个重要因素[2-5]。另有研究表明，Akt蛋白可以促进血管的形成，加速局部血液循环组织的重建，提高器官移植的存活率[6]。还有研究表明，Akt通过磷酸化GSK-3调节糖原的代谢[7,8]，另外，磷酸化的GSK-3可参与多种信号通路的调控[9]，比如WNT等。本研究对日本血吸虫编码Akt蛋白的cDNA进行了初步研究，并制备了针对其的特异性抗体，为深入研究其功能奠定了初步基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 生物材料 新西兰大耳兔购自上海罗泾飞达实验动物养殖场；日本血吸虫中国大陆株尾蚴由中国农业科学院上海兽医研究所钉螺室提供。新西兰大耳兔以腹部贴片法感染约4000条日本血吸虫尾蚴，在感染尾蚴21 d后剖杀兔子，通过肝门静脉灌注法收集血吸虫虫体，PBS充分洗涤虫体以去除粘附物，液氮冻存待用。原核表达质粒pET28a(+) 和大肠杆菌BL21由本实验室保存。

1.1.2 生化试剂 ExTaqDNA聚合酶、T4 DNA连接酶等购自TaKaRa生物工程 (大连) 有限公司；限制性内切酶EcoR I和Hind III及预染蛋白质Maker SM6071购自Fermentas公司；……