TTMV间接ELISA检测方法的建立

2011-08-21武燕斌刘志伟李培锋杨志彪梁爱斌华修国

中国动物传染病学报 2011年4期

阿荣, 武燕斌，刘志伟，李培锋，杨志彪，崔立,梁爱斌, 华修国

（1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2.上海交通大学农业与生物学院上海市兽医生物技术重点实验室，上海 200240；3.上海同济医院血液科，上海 200065）

Torque teno mini virus (TTMV)首次由日本学者Shunji Mishiro 等在2000年初发现[1]，该病毒是一种新型单链环状DNA病毒，病毒颗粒直径小于30 nm[2]，其基因结构类似于细环病毒（Torque teno virus, TTV）和鸡贫血症病毒（Chicken anemia virus, CAV），有2～3个开放读码框架(opening reading frame，ORF) ，ORF1和 ORF2 均在主链上，且较长的ORF1位于较短的ORF2之后, 二者有部分重叠[3]。TTMV由2765～2952 核苷酸组成，以感染人类为主，法国、挪威、巴西等国家均有在健康人血清中检测到TTMV的报道[4-6]。除了感染人类，该病毒也可感染灵长类，而且在猩猩体内感染率高达100%，在黑猩猩和长臂猿的体内的感染率分别为80%和63%[7]。由于该病毒在种系上介于TTV与CAV之间，故被命名为TTV样微小病毒（TTV-like mini virus，TLMV）[8]。2001年由国际委员会（ICTV）将其改名为Torque teno mini virus(TTMV)。2005年，病毒分类-国际病毒分类委员会（ICTV）将其单列为未定科的指环病毒属成员（Anellovirida）[9]。

套式PCR及实时定量PCR是检测TTMV的主要方法，而应用较为广泛的血清学诊断方法——酶联免疫吸附试验（ELISA）检测TTMV尚未见报道[10]。因此，本研究以实验室纯化好的TTMV重组蛋白作为包被抗原，经条件优化，初步建立了一种简便、经济、特异的检测TTMV的间接ELISA 检测方法，并应用于临床血清样品，为TTMV诊断试剂盒的研制奠定了基础。