李 影，王伟利，钱爱东*

(1.吉林农业大学动物科学技术学院，吉林 长春 130118；2.吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心，吉林 长春 130062)

自1982年，细菌活的非可培养状态(Viable but nonculturable state，VBNC)被正式提出至今其研究的实际意义越来越明显，特别是在食品检疫、水质监测等方面尤为突出。随着研究不断深入，用于VBNC细菌检测的技术种类也越来越多，如基于底物吸收能力的Fouge活菌直接计数法、氧化还原能力的呼吸检测法、细胞质膜结构完整性的活/死细菌试剂盒检测法以及其核酸的核酸方法等[1]。然而，由于目前“活细胞”的标准尚未得到充分证明和有效认可，使得这些方法均有一定的适用范围和局限，也均存在着一定的问题和不足。相比之下，基于核酸的分子生物学技术在近几年发展迅速，众多处于VBNC状态下的细菌得以准确而快速检出。并且在该技术推动之下，有关VBNC状态的分子发生机制也得以明确阐述。为此，本文从使用范围、适用条件、优缺点及应用等几方面，对目前在VBNC研究领域中广泛应用的核酸检测技术进行评述。

1 VBNC细菌核酸检测方法建立的前提-确定“活细胞”分子

检测VBNC细菌时，确定“活细胞”的标志是至关重要的。只有那些可培养细胞数为零而活细胞数不为零的细菌才有可能具有VBNC状态。可培养数的测定依照平板计数法便可完成，但要确定“活细胞”数，就必须分清具备了何种特性的细胞才算是“活细胞”。在以往研究中，一般认为：能够保持细胞结构完整(如细胞膜完整)、具有代谢活性(如呼吸运动、吸收生化物质等)或者能合成DNA、存在mRNA分子以及VBNC特异性基因等，只要能满足其中一个标准的细胞即可判定为“活细胞”[2]。……