唐 颖，路义鑫，韩彩霞，李晓云，宋铭忻

(东北农业大学动物医学学院，黑龙江 哈尔滨 150030)

华支睾吸虫(Clonorchis sinensis)属于后睾科(Opisthorchiidae)支睾属(Clonorchis)。华支睾吸虫病是由于其成虫寄生于人、猫、犬等动物的肝脏、胆囊和胆管内而引起的一种人兽共患寄生虫病。该病主要分布于东亚和东南亚地区[1-2]，我国的广东、广西、黑龙江和吉林等省区也是该病的高发区[3]。

目前，华支睾吸虫的研究主要集中在形态学、流行病学和病原鉴定等方面，而对华枝睾吸虫的群体遗传特征研究较少[4]。ITS序列存在于核糖体DNA(rDNA)中，它的进化速度快而且长度较小，协同进化使该片段在基因组不同单元间相对保守，因而适合采用分子技术来探讨科内属间及属下种间的遗传关系。本研究以采自东北7个不同地区的华支睾吸虫为研究对象，采用DNA序列分析方法对其ITS1基因的变异情况进行研究，以期鉴定华支睾吸虫科内属间及属下种间的遗传关系，并为进一步研究华支睾吸虫的起源、分类以及后睾科吸虫的系统发生关系奠定基础。

1 材料和方法

1.1 虫株采自大庆、泰来地区的华支睾吸虫由黑龙江八一农垦大学寄生虫教研室惠赠；采自宾县、海伦、双城、同江和长春地区的华支睾吸虫由哈尔滨医科大学寄生虫教研室惠赠，经形态学鉴定为华支睾吸虫，并由本教研室保存。

1.2 主要试剂 DNA提取试剂盒和胶回收试剂盒购自TIANEN公司；TaqDNA聚合酶、pMD18-T载体、EcoRⅠ和HindⅢ购自TaKaRa公司。

1.3 目的基因的扩增 取不同地区华支睾吸虫成虫各5条，按照DNA提取试剂盒说明提取DNA，-20℃保存。……