于长春 韩 慧 陈 芳

（1山东省枣庄市台儿庄区涧头集镇农业综合办公室，山东省枣庄市 277415；2山东省枣庄市山亭区农业局，山东省枣庄市 277200）

公猪精液的保存三法

于长春1韩 慧2陈 芳2

（1山东省枣庄市台儿庄区涧头集镇农业综合办公室，山东省枣庄市 277415；2山东省枣庄市山亭区农业局，山东省枣庄市 277200）

公猪精液保存的原则是抑制精子活动，降低其代谢速度，以便达到延长精子存活时间的目的。本文分别阐述了保存精液的三种方法及其注意事项，对猪的人工授精工作具有较强的指导意义。

公猪；精液；保存方法

公猪精液的保存原则是抑制精子活动，降低其代谢速度，以便达到延长精子存活时间的目的。为了抑制精子活动，降低其代谢水平，普遍采用的保存方法是降温，随着温度的降低，精子趋于静止，其能量消耗也大为减少。精子降温保存犹如动物的冬眠一样，精子并未丧失生命力，一旦温度升高，环境适宜，精子就会重新活动起来。保存精液的方法如果按温度来分，可分为常温保存、低温保存和超低温保存3种。从保存期限来看，前两种保存期较短，为1～7天，后一种保存期较长，可达数月至数年。

1 常温保存

1.1 保存温度

指精液稀释后保存在一般温度下，如室温下、冷水中、保温瓶中或地窖中。常温保存的温度一般在10～25℃之间。在这种温度下，精子运动虽明显减弱或消失，但其代谢过程并未停止，只是有所降低。因此，只能在一定限度内延长精子存活时间，一般可保存3天左右。此法因为不需要低温设备，在实际生产中具有一定实用价值。在常温下保存的精液，易孳生微生物，故在稀释液中必须加入一定量的抗生素（稀释液配方为葡萄糖6g、柠檬酸钠0.35g、乙二胺四乙酸钠0.37g、碳酸氢钠0.12g、链霉素10万单位、青霉素3万单位、蒸馏水100mL），稀释比例为精液︰稀释液=1︰0.5）。

1.2 冷水保存法

在农村没有冷源条件时，可用冷水保存精液，常用的两种方法为保温瓶保存和水井保存。

1.2.1 水井保存法

将精液瓶用塑料袋装好密封，放在底部穿孔的竹筒或竹篮等容器内，再把竹筒或竹篮连同精液瓶一起放到井底保存，用时从井下取出。

1.2.2 保温瓶保存法

将新鲜的井水装入广口保温瓶（也叫冰壶）内，精液瓶装在塑料袋里，将塑料袋浸在冷水中，每天换水1次。

2 低温保存

指在常温下进一步降低温度，使接近冰点，但使精液不致结冰。方法是把稀释的精液（精液稀释应在精液采出后尽快进行，而且精液与稀释液的温度必须调整到一致，一般是将精液与稀释液置于同一温度中进行稀释，稀释比例为精液︰稀释液=1︰0.5。常用的猪精液稀释液配方有葡柠稀释液——葡萄糖5g、柠檬酸钠 0.5g、蒸馏水100mL和葡柠乙液——葡萄糖5g、柠檬酸钠0.3g、乙二胺四乙酸 0.1g、蒸馏水100mL）放在冰箱内或装有冰块的保温瓶中，温度一般控制在0～5℃之间（精液在低温保存之前，需经预冷平衡，从30℃降至 0～5℃大约需要 1～2小时完成降温全过程，以每分钟降温0.2℃左右为宜）。在这种温度下，精子运动完全停止，代谢显著降低，故保存时间长于常温保存（一般能保存6～8天）。精液使用前，要镜检精子的活力，活力低于0.6或死精多的不要使用。此方法在超低温冷冻猪精液未应用于生产之前，在猪人工授精工作中起到了重要作用。

3 超低温保存

此方法是目前最先进的保存方法，是将精液的温度降到冰点以下，使精液冻结后保存。

3.1 保存温度

超低温保存的温度一般为-196℃（液氮）。在此温度下，精子的代谢完全停止，保存时间较长，经数月甚至数年后仍可应用。冷冻精液使用最普遍的冷源是液氮。应用超低温保存法，须保证冷源（液氮）的供应不能中断。在应用液氮罐保存时，应隔一段时间加一次液氮。

3.2 稀释冷冻

当精液采集后，在30～32℃的温度条件下，静置半小时，或对全份精液离心处理 10分钟，转速为1500～2000转/分钟，进行浓缩，除去精清。而后用1号稀释液稀释（1号稀释液为等温的脱脂乳，按精液︰稀释液=1︰0.5的稀释比例稀释），经1小时温度降至15℃， 平均每 10分钟下降 2.5～2.8℃；之后再用同温的2号稀释液进行第二次稀释（2号稀释液为蔗糖卵黄液，其配方是：12%的蔗糖液：卵黄液=75︰25，按原精液量1︰1的稀释比例稀释），再经2～3小时，温度降至8℃，平均每10分钟下降0.47℃，最后再用3号稀释液稀释（3号稀释液为等温含甘油的蔗糖卵黄液，其配方是：12%的蔗糖液︰甘油︰卵黄液=75︰5︰20，按原精液量1︰1的稀释比例稀释），再静置0.5～1.0小时，待温度降至5℃时，按一定程序进行颗粒滴冻。滴冻的方法是，用5mL的注射器吸取稀释好的精液，在盛有液氮的铝盒内进行滴冻，每粒0.1mL。

3.3 温水解冻

冷冻精液在使用时，需进行解冻。解冻时取1mL解冻液（解冻需要使用解冻液，同时也是精液再次稀释的过程，解冻液常用的配方为：葡萄糖3.7g，二水柠檬酸钠0.6g，乙二胺四乙酸0.125g，碳酸氢钠0.125g，氧化钾0.075g，青霉素10万单位，链霉素0.1g，加蒸馏水至100mL），装入小试管内，放在40～55℃的温水中，使解冻液升温，然后放1粒精液到解冻液中，由温水中取出小试管，并不停的摇动，使之融化。解冻后的颗粒精液，经显微镜检查合格后，应立即给母猪输精。