胡建立 李 健 李 静 马 杰 陈 斌 赵春华*

1(中国医学科学院基础医学研究所，北京协和医学院基础学院，北京 100005)

2(清华大学第一附属医院，北京 100016)

引言

间充质干细胞(mesenchymal ctem cells，MSCs)，是一群存在于身体各个组织内具有贴壁能力的多潜能干细胞，具有成骨、成脂肪、成软骨和成肌等的分化能力，具有很强的应用潜能[1-4]，研究最多的是具有取材方便、扩增迅速、可自体移植并具有多向分化潜能等特点的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells，BMSCs)。BMSCs可以稳定和修复造血微环境，促进造血干细胞增殖、分化，调节淋巴细胞免疫功能，减轻移植排斥反应，因此具有重要的临床应用价值。传统的培养方法通常采10%～15%的胎牛血清作为营养支持，但由于临床应用中增加了病毒感染及异种蛋白所致的异基因免疫应答可能及伦理学问题，严重制约了其临床应用。本实验通过研究在与以往不同的培养基中扩增BMSCs的分化潜能，探索一种完全不加动物源性产品的符合临床需要的人BMSCs体外培养体系，为组织工程产品用于临床奠定基础。

1 材料和方法

1.1 材料

Ficoll分离液(比重 1.077 g/mL，Pharmacia 公司)，细胞培养液有L-DMEM、IMDM、DF12(GibcoBRL公司);胎牛血清(Hyclone公司);胶原酶、胰蛋白酶、谷氨酰胺(GibcoBRL公司);β-巯基乙醇(Merck公司)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastic growth factor，bFGF;Sigma公司)、内皮细胞生长因子 (vascular endothelial growth factor，VEGF;Sigma公司)、表皮细胞生长因子 (epidermal growth factor，EGF;Gibco公司)、血小板衍生生长因子(platelet-derived growth factor BB，PDGF-BB;Sigma公司)、地塞米松(Sigma公司)、β-甘油磷酸钠(Sigma 公司)、抗坏血酸(Sigma 公司)、1-甲基-3-异丁基-黄嘌呤(Sigma公司)、人凝血酶(上海莱士血制品有限公司)，骨髓(解放军307医院)、AB型脐带血浆(北京市脐带血造血干细胞库)、AB型血清(健康志愿者)。……