孙广力,蔡雪辉,郑世民,刘永刚,孙 刚

(1.东北农业大学动物医学学院,黑龙江 哈尔滨 150030;2.黑龙江省动物卫生监督所,黑龙江 哈尔滨 150069;3.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,黑龙江 哈尔滨 150001)

高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(high pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome virus,HP-PRRSV)感染仔猪,可引起与血液循环变化密切相关的病理改变。本试验在以HuN4株PRRSV感染60日龄长白仔猪建立疾病模型基础上,研究了外周血细胞的动态变化,分析了其与PRRSV载量的关系,旨在探讨HP-PRRS的发生、发展及转归机制,为HP-PRRS的防治提供新思路。

1 材料与方法

1.1 病毒 PRRSV HuN 4株(Gen Bank序列登录号为EF635006),由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所猪传染病研究室分离、鉴定[1]。

1.2 实验动物 60日龄长白猪29头,由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供,经荧光定量 RT-PCR[2]和ELISA方法检测PRRSV抗原、抗体均为阴性。

1.3 主要仪器设备 ABX-MICROS-60血液分析仪,法国Horiba ABX公司;荧光定量 PCR仪,澳大利亚Corbett Research公司。

1.4 主要试剂 RNeasy Plus Mini RNA试剂盒,Qiagen公司生产;禽源反转录酶(AMV)、RNA酶抑制剂、r Taq DNA聚合酶、Ex Taq DNA聚合酶,均为TaKaRa公司产品;RT-PCR引物和探针由韦天超设计,上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.5 试验设计

1.5.1 实验动物分组及其处理 29头仔猪随机分为:病毒感染组(18头,简称Ⅰ组)和对照组(11头,简称C组)。其中,Ⅰ组仔猪,经滴鼻感染HuN 4株PRRSV稀释液,3 mL/头;C组仔猪,经相同途径给予无PRRSV的细胞培养物。两组仔猪严格隔离,相同条件下分别饲养。

1.5.2 被检材料的采集 分别于感染后1、3、5、7、14、21、28 、35、42、49 d 和 63 d,经前腔静脉采血 4 mL。其中,2 m L分离血清,-20℃保存,病毒载量检测用;2 m L以EDTA-K2抗凝,用于血常规检测。

1.6 检测指标及方法

1.6.1 临床症状和病理变化观察 试验期内每日测量仔猪体温,观察并记录临床症状。……