施少华,万春和,程龙飞,傅光华,陈红梅,林 芳,林建生,黄 瑜

(1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建 福州 350013;2.福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建 福州 350013)

番鸭呼肠孤病毒病是由呼肠孤病毒科正呼肠孤病毒属番鸭呼肠孤病毒引起的番鸭病毒性传染病。该病主要发生于40日龄内番鸭,临床上以肝、脾表面坏死,纤维素性心包炎为主要病变[1]。目前该病有呈多致病型发生的态势[2]。

2010年1月,浙江省诸暨市某鸭场饲养4000羽240日龄种番鸭,按常规免疫程序进行了H5和H9亚型禽流感疫苗免疫。发病前产蛋率约20%(793枚/4000只),之后开始发病,3 d内共死亡17只,发病第4天后产蛋量下降到200枚。病鸭主要表现精神委顿、食欲不振、生长缓慢等。剖检可见种番鸭肝脏、胰腺、脾脏表面有少量白色坏死点等病变。经病原分离鉴定,初步认定该病原为呼肠孤病毒科成员。

1 材料与方法

1.1 酶、试剂及禽胚 Trizol购自Invitrogen公司;M-MLV Reverse Transcriptase、Go Taq DNA聚合酶购自 Promega公司;d NT P Mixture、DNA Marker DL-2000购自宝生物工程(大连)有限公司;琼脂糖为OXIOD公司产品;其他试剂为国产分析纯。试验用10日龄番鸭胚来源于福建莆田某健康种鸭场。

1.2 病原分离 无菌采集呈典型病变的种番鸭肝脏,处理后接种于血琼脂平板培养基,于37℃有氧和厌氧培养48 h,观察有无细菌生长。同时将种番鸭的肝脏剪碎后按照组织重量1∶4加入灭菌PBS,反复冻融3次后8000 r/min离心5 min,取上清用0.22μm的过滤器除菌,滤过液经尿囊腔接种10日龄番鸭胚6枚,0.2 mL/胚;同时接种灭菌PBS作为对照。每天观察2次。收集24～96 h死亡鸭胚的尿囊液,进行无菌检查和鸡红细胞凝集试验后,-20℃保存备用。……