张 琳,丁雅苓,陈建民,夏 春,2

(1.中国农业大学动物医学院,北京 海淀 100193;2.农业部人畜共患病重点实验室,北京 海淀 100193)

鲤鱼春季病毒血症(Spring Viremia of Carp,SVC)于2008年被我国农业部列为“中华人民共和国进境动物一类传染病”[1]。这是新中国成立以来第一个也是惟一一个鱼类病毒疫病被列为一类传染病,其危害十分严重[2]。SVC主要发生于鲤科鱼。该病感染率与致死率均高,主要流行于欧洲、中东地区和俄罗斯等国;美洲和亚洲的一些国家也时有发生[3]。由于SVC的危害性大,世界动物卫生组织(OIE)制定了必须申报制度。在我国,某地如果发生SVC,必须对该水域中的鱼类进行扑杀。SVC是由SVC病毒(SVCV)引起的一种鱼类传染性急性出血性病毒病。SVCV属弹状病毒科、水疱性病毒属。其基因组长约11019碱基,为不分节段的单链负股 RNA。SVCV病毒粒子主要编码5种结构蛋白,分别为核蛋白(nucleoprotein,N),磷蛋白(phosphoprotein,P),基质蛋白(m atrix protein,M),糖蛋白(glycoprotein,G)和RNA聚合酶蛋白(RNA polymerase,L)[4]。其G蛋白是重要的免疫保护性抗原,决定了SVCV的血清型及毒株的分子特征[5]。

本文对SVCV-C1 G基因进行了亚克隆,表达并纯化了其重组蛋白,构建了SVCV-C1 G系统进化树,阐释了中国分离株SVCV-C1 G与其他弹状病毒糖蛋白的关联性。为研制基因工程疫苗以及进一步深入开展SVCV分子病毒学研究奠定了基础。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 SVCV-C1 G基因由本实验室保存。Hiload16/60 Superdex 75分子筛柱购于Amersham Bioscience公司。AKTA purifier纯化系统购自GE公司。

1.2 SVCV-C1 G基因亚克隆 根据SVCV-C1序列(EU177782)设计了G蛋白的一对表达引物。上游引物P1序列为5′-AAT TCATATGT TTG TTCCATCCGGGCGGAA TA TATCAG-3′(包含 NdeⅠ酶切位点),下游引物 P2序列为5′-CCGCTCGAGAGTTCCCCACCCACTGACCCATTCT-3′(包含XhoⅠ酶切位点)。以实验室已构建的pMD18T/SVCV-C1 G质粒为模板,采用 PCR方法进行扩增[5]。……