张 静，吴开菊，马保瑞，吴俊伟

（西南大学动物医学系，重庆 荣昌 402460）

1 材料与方法

1.1 药品 恩诺沙星，含量为99.8%，批号：1002272；磺胺二甲氧嘧啶钠，含量为98.4%，批号：20100304；土霉素，含量为87.4%，批号：20100410；庆大霉素，含量为624.6IU／mg，批号：10012031；硫酸粘菌素，含量为98%，批号：0809051；苯扎溴铵，含量为0.85%～0.95%，批号：091101。均由重庆方通动物药业有限公司提供。

1.2 菌株 大肠杆菌ATCC25922，购自中国兽医药品监察所。

1.3 培养基及试剂 营养肉汤培养基，北京陆桥技术有限责任公司，批号：100121；麦糠凯琼脂培养基，北京陆桥技术有限责任公司，批号：100310；氢氧化钠，成都东金化学试剂有限公司，批号：20100305。

1.4 体外抑菌试验 根据5种抗菌药物的理化性质，用适宜的溶剂溶解后，配成5120μg／mL的标准储备液，过滤除菌后，分装于灭菌的离心管中，于-20℃保存备用。苯扎溴铵用无菌水配成0.1%储备液，过滤除菌后于-20℃保存备用。

操作方法：以恩诺沙星为例，采用试管二倍稀释法进行，将培养过夜的菌液用肉汤做10倍稀释，恩诺沙星溶液做10倍稀释。取灭菌试管排列在试管架上，经紫外线照射后，在每只试管内加入2mL营养肉汤，在第一支试管内加入2mL恩诺沙星溶液，用移液器吹吸混匀后，吸出2mL至第2支试管，依次做倍比稀释，至第7管混匀后弃去2mL，此时，恩诺沙星的浓度依次为256、128、64、32、16、8、4μg／mL。

每组设阳性对照（菌液对照）、阴性对照（药液对照）、空白对照（肉汤对照）3个对照，用微量移液器取100μL稀释后的菌液，依次加入倍比稀释的含药试管以及菌液对照管中，使最终接种菌量为5×105CFU／mL。每种药物做双样品测定，以无菌生长的最低浓度为最低抑菌浓度。……