陈立瑾，田利源，李秀丽，汪 莉，王玉民，陈树林

（1.西北农林科技大学动物医学院，陕西 杨凌 712100；2.军事医学科学院 生物工程研究所，北京 海淀 100071）

附睾是连接睾丸和输精管的细长管道，哺乳动物的精子在睾丸中生成后，并没有达到功能上的成熟。在穿过附睾时，与附睾中的液体相互作用，才逐步获得授精的能力［1-3］。附睾基因功能的研究已经成为生殖生物学的一个热点。

本文研究的fam12b基因属于小鼠附睾基因，在小鼠出生后不久即有表达，且可以分泌到附睾腔中［4］。近来的研究将fam12b归为RNase A超家族的新成员［5-6］。大部分RNase A基因在大鼠、小鼠和人中含有同源基因［7］，RNase A超家族成员具有多种生物学功能：可以降解核酸、抗菌、抗病毒［8］、抑制肿瘤生成［9］、参与哺乳动物内源宿主防御［10-11］等。fam12b基因在小鼠附睾中高表达［4］，我们推测它可能参与了精子成熟的过程。目前还未见研究报道Fam12b蛋白的功能。

本试验中我们克隆了小鼠附睾基因fam12b，串联后连入pET28（a）载体，于大肠杆菌 Rosetta（DE3）中诱导表达，获得高纯度融合蛋白，为进一步研究Fam12b的功能创造了条件。

1 材料与方法

1.1 材料 8周龄C57雄鼠由北京军事医学科学院实验动物中心提供。

表达载体pET28（a）由国家仪器分析中心张学敏实验室惠赠；大肠杆菌 DH5α、Rosetta（DE3），购自北京全式金生物技术有限公司。

试剂：动物组织总RNA提取试剂盒、普通DNA产物纯化试剂盒，均购自北京天根生物科技有限公司；限制性内切酶Nde I、EcoRⅠ、HindⅢ、EcoR V、T4DNA连接酶，购自NEB生物公司；Ni-NTA亲和柱，购自Qiagen公司；PCR引物合成及测序均由北京奥科生物技术有限责任公司完成。……