王 伟 张 狄 浙江中医药大学第三临床医学院 杭州 310053周大兴 刘 瑶 浙江中医药大学药学院

支气管哮喘是由IgE介导的，多种炎症细胞、炎症介质和细胞因子参与形成的慢性气道炎症。嗜酸性粒细胞（EOS）是哮喘炎症的关键细胞，通过释放GM-CSF、IL-5等多种细胞因子发挥延迟凋亡、增加浸润的作用从而维持呼吸道炎症的存在。本实验拟通过建立豚鼠过敏性哮喘模型，观察小青龙汤对哮喘豚鼠血清IgE水平和肺组织IL-5和GM-CSF基因表达量的影响，探讨其缓解哮喘气道炎症反应的作用机制。

1 材料

1.1 实验动物 健康雄性荷兰种豚鼠48只，体重（200±10）g，普通级。浙江中医药大学实验动物中心提供，合格证号码：SCXK(沪)2008-0016。

1.2 药品与试剂 小青龙颗粒（湖北纽兰药业有限公司，批号20090201）；氨茶碱注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号200805122）；GradeⅡ卵清蛋白（北京生物技术有限公司，批号9006-59-1）；Guinea pig IgE ELISA kit（美国R＆D Systems，批号20091222）；TaKaRa RNAiso plus ，TaKaRa primescriptTMRT-PCR kit， TaKaRa Agarose MS-6（宝生物工程有限公司）；DEPC（美国sigma分装，批号20071006）；引物由上海生工生物工程技术服务公司合成，各引物基因序列：β-actin上游引物 5’-TGCTGTCCCTGTATGCCTCTG-3’，下游引物5’-GAGGTCCTTACGGATGTCAACG-3’，产物长度为464bp；IL-5上游引物5’- AGCTCTGGCAACACTATTCC-3’，下游引物5’-GGTCTCAGCCTTCAATTGTC-3’，产物长度为163bp；GM-C S F上游引物 5’-ATGCCACCATCAATGAAGCC-3’，下游引物5’-CAAAAGGGATAGCAAACAGAA-3’，产物长度为307bp。

1.3 实验仪器 402型超声雾化器（上海四菱医疗器械厂）；DRP-9162型电热恒温培养箱（上海森信实验仪器有限公司）； JY92-超声波细胞粉碎机/隔音箱（宁波新芝生物科技股份有限公司）；LAS 4000 ImageQuant（日本富士公司）；S1000TM Thermal Cycler（美国BIO RAD公司）；AllegraTM64R Centrifuge（美国贝克曼库尔特有限公司）；Forma -86C ULT Freezer（Thermo ELECTRON CORPORATION）；PAC 300多功能水平电泳槽（美国BIO RAD公司）；680型酶标仪（美国BIO RAD公司）；核酸蛋白分析仪（美国BIO RAD公司）。

2 实验方法

2.1 分 组 健康雄性荷兰种豚鼠48只，随机分为6组：正常对照组、哮喘模型组、氨茶碱组、小青龙汤高剂量组、小青龙汤中剂量组、小青龙汤低剂量组，每组8 只。……