高 旭，张 颖，鲁 承

(延边大学农学院动物医学系，吉林延吉133400)

鹅细小病毒病(Goose Parvovirusis，GP)俗称为小鹅瘟是由鹅细小病毒(GPV)引起雏鹅的急性、亚急性和败血性传染病[1]。临床以渗出性肠炎、肝、肾、心等实质器官炎症为特征，主要侵害4日龄～20日龄雏鹅和雏番鸭，具有传播快，发病率和致死率高的特点，10日龄以内雏鹅感染死亡率可达90%～100%，给养鹅业造成了严重的经济损失。1956年，方定一[2]在世界范围内首次报道了该病，并于1961年经鹅胚分离到GPV。本研究对发生于吉林省龙井市周边疑似感染GPV病死鹅病料进行病毒的分离与鉴定，并证明分离到的病毒为GPV强毒。为有效预防本地区GP的发生和蔓延提供了依据。

1 材料和方法

1.1 病料及阳性血清 病料采自吉林省龙井市地区散养户GPV病疑似病例；GPV标准株购自中国兽医药品监察所；GPV阳性血清由本实验室保存。

1.2 实验动物 鹅种卵购于吉林省延吉市非疫区未经免疫农家散养户，鹅胚及雏鹅由本实验室孵化。

1.3 主要试剂 pMD18-T、DNA连接酶、限制性内切酶、ExTaqDNA聚合酶均购自TaKaRa公司；质粒提取试剂盒与胶回收试剂盒购自Omega公司。

1.4 病料处理及病毒分离 无菌采集疑似GP病死雏鹅肝脏，将病料与生理盐水按1∶5比例混合，经研磨制成悬液，反复冻融3次，6000 r/min离心30 min，上清经0.22 μm滤器过滤后接种12日龄的鹅胚尿囊腔，37℃孵育，连续传4代，收集3 d～7 d死亡胚或活胚的尿囊液进行鉴定。

1.5 PCR鉴定 参照已发表的B株GPV基因序列(U25749)保守区设计扩增vp3基因引物，上游(1U26)：5'-ATTGGATCCATGGCAGAGGGAGGAGG-3'(BamHⅠ)，下游(1588L27)：5'-CGCTCGAGGTA CAGATTTTGAGTTAG-3'(XhoⅠ)，预期扩增片段为1605 bp，引物由上海英骏生物技术有限公司合成。……