吕 闯，朱远茂，董秀梅，蔡 红，于 作，高欲燃，薛 飞

(中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物传染病研究室，黑龙江哈尔滨150001)

牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3)为副粘病毒亚科(Paramyxovirinae)呼吸道病毒属(Respirovirus)的成员。BPIV3呈世界性分布，是引起犊牛和成年牛呼吸道疾病的主要病原之一[1]。BPIV3除引起牛的呼吸系统疾病还可以引起免疫抑制，继发细菌感染造成较大的经济损失[2]。本实验室于2008年在我国山东省首次分离到了4株C型BPIV3，该基因型目前仅存在于我国[3]。

BPIV3至少含有6种蛋白，即N、P、M、F、HN和L等蛋白，具有血凝素和神经氨酸酶活性。其中N蛋白为核衣壳蛋白(NP)，由约515个氨基酸组成，是病毒核衣壳的主要成份。NP含有两个结构域。一个是N端结构域，与RNA结合，高度保守；另一个是C端结构域，裸露于装配完成后的核衣壳表面，含有对蛋白酶敏感的磷酸化位点和抗原结合位点，与负链RNA病毒基因组模板的活性有着密切关系[1]。目前我国对BPIV3的研究较少，缺乏有效的诊断技术。为此，本研究利用原核系统表达的NP制备了单克隆抗体(MAb)，对其反应性和特异性进行了鉴定，进行了初步的应用。

1 材料和方法

1.1 病毒株和菌株 BPIV3山东分离株(SD0835)由本实验室分离保存；SD0835病毒株基因组编码的NP重组表达质粒pET30-NP与表达菌BL21由本实验室构建并保存[1]；牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛病毒性腹泻病毒(BVDV)由本实验室保存。

1.2 实验动物和细胞 6周龄～8周龄BALB/c雌性小鼠购自哈尔滨兽医研究所实验动物中心；SP2/0细胞、MDBK细胞由本实验室保存。

1.3 主要试剂 蛋白质纯化试剂盒(Ni-NTA Agarose Kit)购自Invitrogen公司；……