陈振师，刘立科，汪恩强，李业南，华荣虹*

(1.河北农业大学，河北保定 071000；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室，黑龙江哈尔滨150001)

乙型脑炎(Japanese encephalitis，JE)，又称日本脑炎，是由JE病毒(JEV)引起的以中枢神经系统损害为主的虫媒性人畜共患病。JE病例广泛发生于东南亚各地区，而且流行区域有进一步扩大的趋势。在全球每年有3万～5万病例、超过1万人死亡[1]，而我国是JE发病人数最多的国家，占世界总发病数的80%以上[2]；在动物中，猪是JEV的主要易感动物，该病严重影响养猪业的健康发展。对JEV的研究具有重要的公共卫生学意义。

JEV属于黄病毒科黄病毒属单股正链RNA病毒，整个基因组包含一个大的ORF，编码3种结构蛋白和7种非结构蛋白。其中NS1蛋白作为第一个被翻译的重要非结构蛋白，由352个氨基酸组成，是一种分泌型糖蛋白，其分子质量约为48 ku，在JEV感染的细胞中NS1蛋白以NS1和NS1'两种形式存在[3]。NS1蛋白虽然不能诱导机体产生中和抗体，却能刺激机体产生免疫保护作用[4-7]，主要通过补体介导的细胞融合获得中和病毒的能力。本实验室曾用原核细胞表达了NS1蛋白，但原核表达系统表达的蛋白缺少翻译后的加工过程，不能形成正确的天然构象，从而影响蛋白的生物活性。本研究利用真核细胞RK-13构建了表达JEV NS1蛋白的稳定表达细胞系，为研究NS1蛋白的功能及特性奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 主要试剂和材料 表达载体质粒pCAGG-TK-neo、E.coliDH5α感受态细胞和RK-13细胞由哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室保存；……