刘 鹤，刘永刚，石文达，王淑杰，武嘉男，董建国，荣福龙，李丽琴，徐明明，孙 刚，蔡雪辉*

(1.东北农业大学动物医学院，黑龙江哈尔滨150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物疫病诊断中心，黑龙江哈尔滨150001；3.黑龙江省动物卫生监督所，黑龙江哈尔滨150090)

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的，以母猪繁殖障碍，仔猪、育肥猪呼吸道疾病为临床症状的病毒性传染病。该病在1987年首次报道于美国，并呈全球性流行[1]。PRRSV分为欧洲型(Ⅰ型)和北美洲型(Ⅱ型)两种基因型[2]。郭宝清等于1996年首次在我国分离到PRRSV CH-1a株，我国流行的PRRSV的基因型主要为北美洲型[3]。2006年夏季至今，高致病性PRRSV引起PRRS的爆发与流行，给我国养猪业造成严重的经济损失[4]。

PRRSV属于动脉炎病毒科(Arteriviridae)动脉炎病毒属(Arterivirus)，单股正链RNA病毒，基因组全长约15.4 kb，包括9个ORF，其中ORF1a、ORF1b编码病毒的非结构蛋白(Nonstructural protein，Nsp)，ORF2～ORF7编码病毒的结构蛋白[2]。ORF1a和ORF1b编码多聚蛋白pp1a和pp1ab，最终可以水解为14个Nsp[5]，在PRRSV的复制过程中起重要作用[6]。目前Nsp7的结构及其在PRRSV复制周期中的作用尚未明确，研究显示Nsp7抗体产生时间早，抗体水平高，持续时间长，表明Nsp7与机体免疫应答关系较为密切[7]。由于Nsp7基因在Nsp中相对保守，不同病毒株之间差异变化较小，因此适于作为检测抗原检测不同病毒株的抗体水平[8]。本研究采用原核表达系统表达了Nsp7，并制备了抗Nsp7的多克隆抗体。实验结果显示Nsp7具有良好的免疫原性，为进一步揭示PRRSV Nsp7抗体水平变化和抗原定位奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 病毒株、血清、菌株与载体 PRRSV HuN4株、PRRSV猪阳性血清和阴性血清、pET30a(+)、大肠杆菌JM109、BL21(DE3)均由中国农业科学院哈尔滨兽医研究所动物疫病诊断中心保存。……