赵金花，沈志强，朱 辉，李 峰1,，甄洪花，苗立中1,，单 虎

(1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东滨州256600；2.青岛农业大学动物科技学院，山东青岛266109；3.山东绿都生物科技有限公司，山东滨州256600)

鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis，DVH)是由DVH病毒(Duck hepatitis virus，DHV)引起雏鸭的一种以肝脏病变为主要病理变化的急性致死性传染病。近年来，国内外相继报道了新型DHV(N-DHV)。2002年，苏敬良等从北京和广西分离到2株与DHV-1及DHV-3型无血清学相关性的DHV，并将其定为N-DHV[1]。范书才等对从广东分离的DHV GD株进行生物学和理化学特性以及交叉中和试验，鉴定结果表明GD株的抗原性与DHV-1无关，属于N-DHV[2]。2007年，Tseng等在台湾发现一株新型DHV[3-4]，同年Kim等在韩国也发现了一株N-DHV，并对其进行基因组序列测定与分析[5-6]。N-DHV的不断出现严重危害养鸭业的发展。

本研究对从广西、河南和山东发病鸭体内分离的3株病毒进行初步鉴定，确定为N-DHV。并对分离株的VP1基因进行序列测定及相关分析，为N-DHV分子流行特点的研究奠定基础。

1 材料和方法

1.1 实验材料 病料样品分别来自广西、河南以及山东发病鸭场；DHV-1及DHV-1阳性血清购自中国兽医药品监察所；N-DHV阳性血清由山东省滨州畜牧兽医研究院实验室制备，中和效价≥1∶64；SPF鸡胚购自济南斯帕法斯家禽有限公司；鸭胚及雏鸭均购自滨州久久鸭场。

1.2 主要试剂 反转录酶(M-MuLV)购自北京百泰克生物技术有限公司；反转录酶抑制剂、dNTP、rTaqDNA聚合酶、DNA Marker购自TaKaRa公司；TRIzol购自上海生工生物工程技术服务有限公司。

1.3 样品处理 将病料样品按1∶5比例加入灭菌生理盐水，匀浆捣碎，反复冻融3次，8000 r/min离心10 min，取上清液加入青霉素、链霉素使其终浓度均为2000 IU/mL，37℃作用30 min，以0.22 μm过滤备用。……