刘 璐，付 聪(总后丰台综合仓库药材供应站，北京 0007;.解放军307医院药剂科，北京 0007)

肠康颗粒是由黄连、乌梅、党参、赤石脂等十一味药材组成的复方制剂，具有健脾益肾，涩肠止泻，温中止痛之功效，临床用于慢性结肠炎、溃疡性结肠炎等的治疗。为控制制剂的质量，采用薄层色谱法鉴别了肠康颗粒中的黄连和乌梅;采用高效液相色谱法对处方中的君药黄连药材中所含的盐酸小檗碱进行了含量测定，结果较满意，为控制药品质量提供了依据。

1 仪器及药品

Agilent-1200高效液相色谱仪;MWD检测器(美国Agilent公司)。盐酸小檗碱对照品、黄连对照药材、熊果酸对照品均由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G薄层板由青岛海洋化工厂提供;液相用乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。肠康颗粒(规格∶10 g/袋;解放军307医院制剂室自配;批号:20090525、20090526、20090527)。

2 薄层色谱鉴别

2.1 黄连薄层色谱鉴别［1，2］取本品内容物3 g，加甲醇25 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.25 g，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇配成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例制成缺黄连的阴性对照样品，同供试品溶液的制备方法，制得阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VI B)试验，吸取上述4种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-无水乙醇-甲酸(7∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。见图1。

图1 黄连薄层色谱图

2.2 乌梅薄层色谱鉴别［1，2］取本品10 g，加甲醇30 ml，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，加乙醚振摇提取2次，每次20 ml，合并乙醚液，挥干，残渣用石油醚(30～60℃)浸泡2次，每次10 ml，倾去石油醚，残渣加无水乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取熊果酸对照品，加无水乙醇制成每1 ml含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。按处方比例制成缺乌梅的阴性对照样品，同供试品溶液的制备方法，制得阴性对照溶液。照薄层色谱法(中国药典2010版一部附录VI B)试验，吸取上述三种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(20∶5∶8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。见图2。

图2 乌梅薄层色谱图

3 含量测定［1～3］

3.1 色谱条件 色谱柱:DiscoveryⓇC18(5 μm，4.6 mm×250 mm)分析柱;流动相:以乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钠(磷酸调节pH值至3)(30∶70)为流动相;检测波长为265 nm;柱温40℃。

3.2 实验方法

3.2.1 对照品溶液的制备 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇(1∶100)制成每1 ml含23 μg的溶液，即得。

3.2.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入盐酸-甲醇(1∶100)25 ml，密塞，称定重量，超声处理(功率300 W，频率40 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇(1∶100)补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

3.2.3 阴性对照溶液 按处方比例制备缺黄连药材的阴性对照样品，按3.2.2项下供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

3.2.4 专属性试验 按3.1色谱条件，分别吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10 μl，进样，结果阴性对照在与盐酸小檗碱对照品相同保留时间处，未显示明显色谱峰，认为无干扰。供试品HPLC色谱图中盐酸小檗碱峰与杂质峰的分离度均应大于1.5，理论塔板数以盐酸小檗碱峰计算应不低于3 000。见图3。

图3 肠康颗粒HPLC色谱图

3.2.5 线性范围的考察 取盐酸小檗碱对照品适量，精密称定，加盐酸-甲醇(1∶100)溶解并制成每1 ml含0.223 6 mg的溶液，作为对照品储备液。分别精密量取对照品储备溶液 0.25、0.5、1、2、4、8 ml置于10 ml量瓶中，加盐酸-甲醇(1∶100)至刻度，摇匀。分别精密吸取上述对照品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按正文所述色谱条件测定峰面积，以进样浓度(μg/ml)为横坐标(X)，峰面积为纵坐标(Y)，绘制标准曲线，计算回归方程。回归方程为 Y= －19.85+37.17 X，r=0.999 99(n=6)。结果表明:盐酸小檗碱在5.59 ～178.88 μg/ml范围内有良好的线性关系。

3.2.6 样品溶液稳定性试验 精密称取供试品(批号20090525)0.502 6 g，照上述方法制备供试品溶液，精密吸取 10 μl，分别于配制后 0、2、4、8、12、16 h依法测定，盐酸小檗碱峰面积的 RSD为0.57%。结果表明，供试品溶液在16 h内较稳定。

3.2.7 重复性试验 取同一批号肠康颗粒样品(批号20090525)6份，按“供试品溶液”项下方法操作，结果盐酸小檗碱的平均含量为12.61 mg/袋;RSD=0.52%(n=6);表明此法重复性良好。

3.2.8 加样回收率实验 取已知含量的肠康颗粒样品0.25 g(批号20090525，盐酸小檗碱含量为1.261 mg/g)，按1∶1的比例分别加入对照品适量，按供试品溶液的制备方法制备供试液，平行试验6份，按上述色谱条件，测定其含量，结果其平均回收率为103.32%，RSD为1.26%。回收率试验的测定结果见表1。

表1 肠康颗粒中黄连的加样回收率试验结果

3.2.9 样品测定 取肠康颗粒各批次样品，按上述方法测定，计算盐酸小檗碱含量，结果见表2。

表2 肠康颗粒中盐酸小檗碱含量测定结果(n=2)

由于测定样品的批次有限，根据测定结果，暂定本品每袋含黄连以盐酸小檗碱(C20H18ClNO4)计，不得少于 9.0 mg。

4 讨论

4.1 提取溶剂与提取方法考察 在样品的前提取处理中［1］，对稀乙醇、乙醇、甲醇、盐酸-甲醇(1∶100)的考察结果表明，盐酸-甲醇(1∶100)作为提取溶剂提取率最高。对冷浸法、热回流提取法、超声处理法的考察结果表明，超声处理法效果较理想。此外，对超声处理的时间进行了考察，结果超声处理30 min，即可以将有效成分基本提取完全。

4.2 色谱条件的选择 选择C18色谱柱，比较了不同商品类型的色谱柱Agilent ZORBAX SB-C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)分析柱、SHIMADZU VP-ODS(250 mm ×4.6 mm;5 μm)分析柱、及 Agilent ZORBAX EXTEND-C18(250 mm × 4.6 mm;5 μm)分析柱，结果上述C18分析柱对盐酸小檗碱的分离效果均较好［1～3］。以乙腈-0.05 mol/L 磷酸二氢钠溶液(用磷酸调节pH至3)(30∶70)为流动相，可同时分离多种小檗碱型生物碱类化合物，达到了较满意的分离效果。

4.3 检测波长的选择 在实验中，对盐酸小檗碱对照品［2］溶液，在200～400 nm分别进行光谱扫描，在265 nm处有最大吸收，测定灵敏度最高，故选择其为测定波长。

［1］中国药典2010 版.一部［S］.2005:54，213.

［2］王宝琴.中成药质量标准与标准物质研究［M］.北京:中国医药科技出版社，1994:118.

［3］安登魁.现代药物分析选论［M］.北京:中国医药科技出版社，2000:781.