王亚珍 吕品田 王凤红 王辰英 (河北省人民医院保健处，河北 石家庄 05005)

赤芍为毛茛科植物芍药或川芍药的干燥根，其主要活性成分已证实为赤芍总苷(TPG)。其化学本质为单萜苷类化合物，具有抗血栓、抗凝作用，抗动脉粥样硬化、抗心肌或脑组织损伤作用等广泛药理作用〔1，2〕。近年研究证实TPG也具有抗肿瘤的作用〔3〕，但相关机制仍不清楚。黑色素瘤恶性程度高，复发转移迅速，迄今尚无有效治疗措施。本研究通过观察TPG对人黑色素瘤细胞株A375生长的影响及凋亡调节基因表达的检测，探讨TPG抗肿瘤的机制，为TPG防治黑色素瘤提供理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞株及药物 人黑色素瘤细胞株A375:购自中国科学院上海细胞研究所。赤芍总苷由河北医科大学药学院惠赠，纯度＞95%。

1.1.2 主要试剂 MTT，购自 Sigma公司;Caspase-3、Bcl-2、Bax、Fas、FasL及GAPDH一抗购自Santa Cruz公司;RT-PCR试剂盒购自大连宝生物技术公司;所用引物由上海生工生物技术公司合成，引物序列如下:Caspase-3上游引物5'-GGACAACAACGAAACCTCCG-3'，下游引物:5'-CTCCACTGGTATCTTCTGGCA-3'，扩增产物长度 568 bp;Bcl-2上游引物 5'-AGAGGGGCTACGAGTGGGAT-3'，下游引物5'-TCAAA GAAGGC CACAATCCTC-3'，扩增产物长度373 bp;Bax上游引物5'-GAGGATGATTGCTGACGTGGA-3'，下游引物 5'-TCTTCCAGATGGTGAGCGAG-3'，扩增产物长度337 bp;Fas上游引物5'-TGGAGTTGAAGAGGAGCGT-3'，下游引物 5'-CATTTGGTGTTGCTGGTTCG-3'，扩增产物长度393 bp;FasL上游引物5'-ACCTCCATCACCACTACCA-3'，下游引物 5'-CAACTTCTTCTCCTCCATTAGC-3'，扩增产物长度531 bp;内参照β-actin上游引物5'-CAGGGTGTGATGGTGGG-3'，下游引物 5'-GGAAGAGGATGCGGCAG-3'，扩增产物长度500 bp。

1.2 方法

1.2.1 MTT法测定细胞抑制率 黑色素瘤A375细胞以含10%胎牛血清的RPMI 1640常规培养，取对数生长期的细胞制成细胞悬液，接种于 96 孔板，每孔 200 μl，加入 12.5、25、50、100、200 mg/L TPG，对照组加等量生理盐水，每组6个复孔。分别孵育24、48 h后进行MTT法，酶标仪测量各组细胞吸光度OD490值，计算生长抑制率(%)=(1－实验组OD值/对照组OD值)×100%。……