王晓梅 李正红 夏满莉 胡 杰 姜翠荣 高 琴 (蚌埠医学院生理学教研室，安徽 蚌埠 233030)

硝酸甘油(nitroglycerin，GTN)在临床应用非常广泛，尤其是治疗心肌缺血相关疾病，如稳定性、不稳定性心绞痛、急性心肌梗死等效果显著，但在治疗慢性心肌缺血方面效果不明确，且长期使用GTN其抗心肌缺血及扩血管效应降低或消失，存在“耐受现象”〔1〕。Chen等〔2〕发现线粒体乙醛脱氢酶2(acetaldehyde dehydrogenase 2，ALDH2)作为一种重要的线粒体氧化还原酶参与硝酸盐类生物活化，提示硝酸盐类耐受可能与ALDH2活性被抑制有关。本实验室在离体大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型上观察不同浓度GTN对心肌损伤的作用，进一步分析其机制是否与ALDH2的释放有关。

1 材料与方法

1.1 实验动物和材料 健康雄性 Sprague-Dawley(SD)大鼠体重，200～250 g，清洁级，40只，由蚌埠医学院实验动物中心提供。GTN注射液为北京益民药业有限公司产品。总RNA提取试剂Trizol购自Invitrogen公司;逆转录试剂盒、PCR扩增试剂盒购自Fermentas公司;焦碳酸二乙酯(DEPC)购自上海生工生物工程有限公司;琼脂糖、溴化乙锭(EB)、溴酚兰购自上海生工生物工程有限公司;其余为国产分析纯。改良 Krebs-Henseleit(K-H) 液成分:NaCl 118 mmol/L，KCl 4.7 mmol/L，KH2PO41.2 mmol/L，MgSO41.2 mmol/L，CaCl22.5 mmol/L，NaHCO325 mmol/L，Glucose 11 mmol/L，pH 7.3 ～7.4。ALDH2和β-actin引物由上海生工生物工程有限公司合成。目的基因ALDH2上游引物为5'-GTG TTC GGA GAC GTC AAA GA-3'，下游引物为5'-GCA GAG CTT GGG ACA GGT AA-3'，扩增片段长度187 bp;内参β-actin上游引物为5'-GAT GGT GGG TAT GGG TCA GAA GGA C-3'，下游引物为5'-GCT CAT TGC CGA TAG TGA TGA CT-3'，扩增片段长度630 bp。

1.2 方法

1.2.1 大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型复制及分组 雄性SD大鼠断头后开胸，迅速取出心脏，置于4℃ 改良K-H液中，固定于Langendorff灌流装置，K-H液常规恒压(76 mmHg)灌流，以95%O2+5%CO2饱和，维持灌流液温度37℃。将充水乳胶囊由切开的左心耳处插入至左心室，囊内压力经特氟纶管传递至压力传感器，由MedLab生物信号采集处理系统记录和分析。……