张殿君 谭 岩 付长峰 张利恒 (吉林大学第一医院，吉林 长春 3002)

少突胶质细胞是中枢神经系统的髓鞘形成细胞，与多发性硬化、脑白质发育不良及脑脊髓损伤等中枢神经系统疾病关系密切。但体外诱导神经干细胞(NSCs)分化研究表明，NSCs虽然具有多分化潜能，但在自然分化状态下分化为星形胶质细胞的潜能最大，少突胶质细胞所占比例最少〔1〕。因此，如能使用一定方法使NSCs定向分化为少突胶质细胞，可为中枢神经的损伤修复提供更多的种子细胞。研究发现胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对于神经细胞正常生长、发育的调节具有重要作用，可促进神经细胞的突触形成、树突快速生长及髓鞘生成;可以影响不同类型神经细胞及相关细胞的生存能力，提高神经细胞的分化和发育;可以促进少突胶质细胞以及髓鞘的生长，并能促进肿瘤坏死因子-α(TNF-α)脱髓鞘后的髓鞘再生〔2～5〕。因此，本研究拟探讨IGF-1诱导脊髓源性NSCs向少突胶质细胞方向分化的机制，为探索治疗脊髓损伤的新方法奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 DMEM/F12(1∶1)培养基，B27添加剂，胎牛血清，购自Gibco公司;脂质体2000、抗磷酸化细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抗体，购自Invitrogen公司;RT-PCR试剂盒，购自TAKARA公司;ERK特异性抑制剂PD98059，购自Promega公司;新生24 h内的Wistar大鼠(SPF级)，由吉林大学动物室提供;重组载体pcDNA3.1-GFP-IGF由本实验室自行构建并保存。

1.2 方法

1.2.1 NSCs的分离 新生Wistar大鼠断颈处死后，无菌条件下取出脊柱，机械法分离细胞，用神经细胞培养液〔DMEM/F12为基础培养基，B27添加剂终浓度为1%，碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和重组人表皮生长因子(EGF)终浓度均为20 ng/ml〕调节细胞终浓度为2×105，接种到10 cm平皿，37℃、5%CO2培养箱中增殖培养。……