李建生 王守富 张慧俭 秦金利 李素云 余海滨 王 峰 李 亚 刘四化

(河南中医学院老年医学研究所，河南 郑州 450008)

Toll样受体4(TLR4)是近年来逐渐明确的模式识别受体，主要介导内毒素(LPS)信号从细胞外至细胞内的跨膜转导，体内外实验表明其表达量与前炎症因子释放量直接相关〔1，2〕。过度炎症反应则导致细胞组织损伤，引起脏器功能障碍或衰竭。而有关TLR4在老年多器官功能障碍综合征(MODS)发病中所起作用研究较少，本实验旨在进一步探讨TLR4在老年感染性多器官损伤发病中的意义。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 清洁级SD老龄雄性大鼠(21月龄)，55只，体重(550±70)g;SD青年雄性大鼠(6月龄)，25只，体重(200±20)g，均由河南省实验动物中心提供，合格证号:XK20050001。

1.1.2 试剂 肺炎克雷伯杆菌由中国生物制品检验鉴定所提供，种系号:K46114，使用前用无菌生理盐水稀释至1.2×1010cfu/ml。RT-PCR相关试剂:Trizol为Invitrogen公司提供，批号:1334257。RT-PCR一步法试剂盒为宝生物工程(大连)有限公司提供，批号:BK3601。TLR4、脂多糖结合蛋白(LBP)、亲免疫性蛋白(CD14)和白介素受体相关激酶(IRAK-1)mRNA及内参由上海博尚生物技术有限公司合成，订单号:70714600，70614601。免疫组织化学抗体:TLR4和核转移因子(NF-κB)单克隆抗体由武汉博士德生物工程有限公司提供，批号:BA1717和BA0610。琼脂糖由英国OXOID LIMITED BASINGSTOKE提供，批号:889970-02。

1.2 方法

1.2.1 模型与分组 按李建生等〔3〕报道的方法复制大鼠多器官损伤模型。模型成功标准参照胡森等主编的《多器官功能障碍综合征》提出的动物MODS时器官功能障碍分期诊断及评分标准〔4〕。老龄大鼠35只分为2组，老龄对照组10只、老龄模型组25只;青年大鼠25只分为2组，青年对照组10只、青年模型组为15只。……