李中平 任文辉 张保丽 蔺美玲 陈红梅 赵 丽 王志强 张小郁

(兰州大学基础医学院生理学与心理学研究所，甘肃 兰州 730000)

目前，许多人工合成的降血糖药物都很昂贵且长期服用有许多副作用，而从天然植物中提取出来的抗糖尿病药物具有低毒性、低副作用等优点。槟榔碱是槟榔种子中所含生物碱的主要成分，有研究表明槟榔有抗炎、抗过敏作用，低剂量槟榔碱能够改善2型糖尿病大鼠糖脂代谢紊乱〔1～3〕。但是槟榔碱对INS-1胰岛细胞的有关研究尚少。因此，本文体外建立链脲佐菌素(STZ)致胰岛细胞损伤模型，研究槟榔碱对STZ损伤胰岛细胞的保护和修复作用及其机制，为槟榔碱治疗糖尿病提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料 大鼠胰岛素瘤细胞(INS-1细胞)，购自中国典型培养物保藏中心。

1.2 试剂 槟榔碱(Arecoline)，纯度＞98%，为陕西旭煌植物科技发展有限公司生产。RPMI 1640、胰蛋白酶均购自Gibco公司。STZ、十二烷基硫酸钠(SDS)、噻唑蓝(MTT)均购自Sigma公司。新生牛血清为杭州四季青公司产品。总抗氧化能力(TAOC)和丙二醛(MDA)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，用UV-VIS 756MC分光光度计检测。胰岛素由兰州市中国人民解放军第一医院检验科测定。

1.3 仪器 微孔板分光光度计(Power Wave X BIO-TEX INSTRUMENTS.INC)，GC-1200 γ 放射免疫计数仪(合肥)，倒置显微镜(OLYMPUS CKX41)，EPPENDORF 5810R型台式冷冻离心机(德国艾本德股份公司)，CO2孵箱(inCu safe copper ALLOY STAINLESS)，SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台(苏州净化厂)。

1.4 方法

1.4.1 细胞培养 用含10%新生牛血清，2 mmol/L L-谷氨酰胺，1 mmol/L 丙酮酸钠，50 μmoL/L β-巯基乙醇，5.6 mmol/L 葡萄糖，1×105IU/L青霉素和100 mg/L链霉素的RPMI1640培养基，在37℃，5%CO2及饱和湿度的恒温箱中培养，每2～3 d传代一次。……