于 静 孙红霞(北华大学医学院，吉林 吉林 3203)

心肌纤维化(MF)表现为心室成纤维细胞(CFb)过度增殖和分泌大量胶原纤维，引起间质纤维化并参与心室重塑。近年来文献报道，一氧化氮(NO)等生物活性物质与MF的发生发展密切相关〔1〕。研究还证实氧化还原反应参与了 MF的形成〔2〕。丹参酮ⅡA(TanshinoneⅡA，TSN)是常用的活血化瘀中药丹参的提取物，具有抑制CFb增殖和间质纤维蛋白分泌作用〔3〕。本实验在细胞水平上观察 TSN对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导CFb增殖，以及对羟脯氨酸(Hyp)、NO水平、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的影响，探讨其抑制MF的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料与细胞 TSN(中国药品生物制品检定所生产，编号110766-200416);胰蛋白酶，宝泰克生物试剂;AngⅡ、四氮唑盐(MTT)、碘化丙啶均为Sigma公司产品;NO试剂盒为南京建成生物技术公司产品;IMDM培养基购自HyClone Utah公司;胎牛血清(FCS)，杭州四季青;Heraeus型CO2培养箱;SUNRISE TECAN FO39300型自动酶联检测仪(澳大利亚);EPICS-ProfileⅡ型流式细胞分析仪。日本Olympus倒置显微镜;超净工作台。出生1～3 d的Wistar大鼠心室，胰酶消化，收集细胞，置于含100 ml/L FCS的IMDM培养液中，在50 ml/L CO2、37℃、饱和湿度条件下培养60～90 min。采用差速贴壁法分离CFb，加入含100 ml/L FCS的IMDM继续培养。经倒置显微镜、透射电镜、免疫组化纤维黏连蛋白染色阳性和平滑肌肌动蛋白染色阴性鉴定为所需的CFb，纯度达98%，生长近融合时按1∶3传代，实验采用2～4代细胞。

1.2 分组 分5组，对照组:含有IMDM的培养液;AngⅡ组:培养液中加入终浓度为10－7mol/L的AngⅡ;TSN组1:培养液中同时加入10－7mol/L TSN和10－7mol/L AngⅡ;TSN组2:培养液中同时加入10－6mol/L TSN和10－7mol/L AngⅡ;TSN组3:培养液中同时加入10－5mol/L TSN和10－7mol/L AngⅡ。

1.3 MTT比色法测定CFb的增殖活力 各组细胞接种于96孔培养板，每组细胞9复孔，各处理组作用36 h。……